女性高危型人乳頭瘤病毒感染調查范文

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中國每年新發宮頸癌患者75000人，另有40000人死于宮頸癌［1］。研究表明，高危型人乳頭瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）持續感染是引起宮頸癌的主要致病因子［2-4］。高危型HPV主要包括16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66型［5-6］。通過定期進行高危型HPV篩查，有助于預防和早期發現宮頸癌，減少宮頸癌的發病率和死亡率［7］。現有的2003年~2012年廣州地區的女性高危型HPV的感染情況的相關報道，由于研究對象和檢測方法的不同導致這十年的高危型感染狀況、型別分布情況存在很大的差異，即便同一年份的高危型HPV的感染情況也存在差異［8-13］。通過采用同種檢測方法對不同年份的高危型HPV感染情況進行比較，有利于觀察廣州地區的女性高危型HPV的變化情況。為了更好地了解近兩年廣州市各年齡段女性高危型HPV的感染狀況、型別分布情況，以便對該地區宮頸癌的預防提供指導，本文對2013年和2014年來院就診的女性患者或體檢者宮頸分泌物中的13種高危型HPV特異性DNA核酸片段分型定性檢測結果進行了回顧性分析。

1對象與方法

1.1對象2013年1月1日~2014年12月31日在廣州軍區廣州總醫院進行宮頸分泌物高危型HPV分型檢測的門診、住院的女性患者及體檢者，共2501例，年齡18~82（41.14±9.091）歲。

1.2方法

1.2.1標本采集女性生殖道用無菌生理鹽水棉球洗去宮頸外分泌物，再用無菌棉拭子插入宮頸內，停5s后旋動棉拭子采取宮頸分泌物，將棉拭子置入無菌試管內，密閉送檢。

1.2.2試劑與儀器高危型HPV分型核酸測定試劑盒（熒光PCR法，上海之江生物科技股份有限公司），LightCycler®480實時熒光定量PCR儀（羅氏公司）。

1.2.3高危型HPV分型檢測

1.2.3.1樣本及對照品反應模板制備標本試管中加入1mL無菌生理鹽水，充分振蕩混勻，吸液體至1.5mL離心管中，13000r/min離心5min。吸棄上清，加入1mL無菌生理鹽水，充分振蕩混勻，13000r/min離心5min。吸棄上清，沉淀加入100μL核酸提取液，振蕩混勻，金屬浴100℃10min。13000r/min離心5min，取上清4μL作為PCR反應模板。陰陽性對照品各取100μL于1.5mL離心管中，分別加入核酸提取液100μL，充分混勻，金屬浴100℃10min。13000r/min離心5min，取上清4μL作為PCR反應模板。

1.2.3.2試劑配制及加樣取8種配制好的PCR反應液36μL于PCR反應板中，加入4μL的樣本及對照品PCR反應模板。

1.2.3.3PCR擴增反應板置于熒光定量PCR儀，循環參數94℃×10min；93℃×10s→62℃×31s，循環40次，單點熒光檢測在62℃，反應體系40μL。熒光通道檢測選擇：選用FAM和VIC通道。

1.2.3.4質量控制基線調整取6~15個循環的熒光信號，閾值設定原則以閾值線剛好超過陰性對照品檢測熒光曲線的最高點。陰性對照品檢測結果應為：FAM、VIC通道Cq均無顯示，陽性對照品檢測結果應為：Cq顯示≤35，否則無效。

1.2.3.5結果判斷當8種檢測混合液FAM、VIC通道Cq均無顯示，檢測樣本判定為陰性；如Cq在38~40之間，需重復測定，如仍在38~40之間，且擴增曲線呈典型的S型，則判斷為陽性，若非典型S型曲線，則判為陰性。按表1進行結果判斷。1.2.4統計學分析采用SPSS16.0軟件進行數據處理，各年份高危型HPV感染率、各年齡組高危型HPV感染率以及高危型HPV亞型構成比都用行×列表資料的χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.12013年和2014年高危型HPV陽性率2013年和2014年的體檢組、門診住院組和體檢組+門診住院組的高危型HPV的陽性率差異均無統計學意義（表2）。

2.2各年齡組高危型HPV感染率2013年的983例女性宮頸分泌物標本中，檢出高危型HPV146例。按年齡分為5個年齡組，<30歲組檢出10例，陽性率12.05%；30~歲組檢出48例，陽性率為14.33%；40~歲組檢出68例，陽性率為16.83%；50~歲組檢出15例，陽性率為11.63%；60歲以上組檢出5例，陽性率為15.63%。2014年的1518例女性宮頸分泌物標本中，檢出高危型HPV221例。<30歲組檢出21例，陽性率15.33%；30~歲組檢出87例，陽性率為15.73%；40~歲組檢出77例，陽性率為13.34%；50~歲組檢出22例，陽性率為11.52%；60歲以上組檢出14例，陽性率為23.33%。2013年、2014年的各年齡組高危型HPV陽性率差異無統計學意義（表3）。

2.3高危型HPV亞型構成比共檢出13種亞型，分別為16型，18型，31型，33型，35型，39型，45型，51型，52型，56型，58型，59型，68型。2013年的146例陽性標本中，單一型別感染103例，二重感染39例，三重感染4例，檢出頻次為193，各亞型構成比從高到低排列依次為HPV5218.13%，HPV1617.10%，HPV5815.54%，HPV568.29%，HPV397.77%，HPV516.73%，HPV685.70%，HPV595.18%，HPV314.15%，HPV354.15%，HPV183.11%，HPV332.59%，HPV451.55%。2014年的221例HPV陽性標本中，單一型別感染183例，二重感染32例，三重感染6例，檢出頻次為265，各亞型構成比從高到低排列依次為HPV5222.26%，HPV1616.23%，HPV5816.23%，HPV688.30%，HPV186.79%，HPV516.42%，HPV566.04%，HPV394.15%，HPV313.77%，HPV333.40%，HPV592.64%，HPV352.26%，HPV45，1.51%。2013年和2014年高危性HPV亞型的總體構成比差異無統計學意義（表4）。

3討論

通過對2013年和2014年的女性宮頸分泌物標本進行13種高危型HPV亞型（16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68）檢測，結果顯示這兩年廣州地區女性高危型HPV總感染率分別為14.85%和14.56%，表明廣州地區女性高危型HPV感染率仍比較高，但兩年的感染率在體檢組、門診住院組和體檢+門診住院組間均無變化。Jing等［14］報道廣東地區HPV感染率為7.3%，林盈等［15］報道深圳龍崗地區高危型HPV感染率為15.9%，黃玉芳等［16］報道廈門地區高危型HPV感染率為16.01%，錢慧珍等［17］報道大連地區高危型HPV感染率為13.73%。可能由于研究的地區、人群、檢測的亞型數量以及檢測方法不同，與其他地區已報道的高危型HPV感染率比較，我們的結果存在一定差異。另外，我院2014年的標本量比2013年的標本量多1/3，側面反映了本地區醫患雙方對宮頸癌預防和早期診斷的認識和自覺進行HPV篩查的意識明顯提高。

受檢者年齡主要分布于30~50歲，該年齡段的受檢者占受檢總人數的1/3以上，可見該年齡段的女性自我保健意識比較強。雖然30歲以下和50歲以上的患者數量較少，有可能導致感染率相對偏高。但從最終的數據分析結果看，2013年和2014年各年齡段女性高危型HPV感染率并無明顯差異，因此建議更多30歲以下和50歲以上的女性也應自覺進行高危型HPV篩查。2013年和2014的高危型HPV的感染以單一型別感染為主，分別占53.37%和69.06%。多重感染僅檢出二重感染和三重感染，未檢出四重感染以上的多重感染。目前，大多數女性在一生的某個階段感染過HPV。大部分的HPV感染是無任何癥狀并且在6~18月能夠被自身免疫系統清除。僅少數女性會持續感染HPV并經過一段潛伏期后發展為宮頸上皮內瘤變［18］。相對于單一型別感染，多重感染的女性者更易發展為宮頸上皮內瘤變2級及高度鱗狀上皮內病變［19-21］。Muñoz等［6］報道全球90%的女性宮頸癌患者中檢出的HPV亞型的排序依次為HPV16、HPV18、HPV45、HPV31、HPV33、HPV52、HPV58、HPV35。其中HPV16、HPV18、HPV45、HPV31占所有檢出HPV亞型的80%［22］。

Wu等［23］報道中國宮頸癌患者中最常見的型別是HPV16、HPV58、HPV33、HPV18、HPV6、HPV31。Jing等［14］報道廣東地區的最常見的型別依次為HPV16、HPV52、HPV58、HPV18、HPV45。Shen等［24］報道河南地區的最常見型別依次是HPV16、HPV52、HPV58、HPV33、HPV18、HPV6、HPV39。而我們的分析發現，2013年和2014年廣州地區人群高危型HPV最常見的3種型別依次為HPV52、HPV16、HPV58型，占所有檢出高危型HPV亞型的50%以上。這3個HPV型別雖也見于上述國內外報道中，但檢出頻率排序與他們又有所差異。目前的HPV疫苗主要是針對HPV16、HPV18、HPV6、HPV11，大量的研究表明注射疫苗可降低HPV16、HPV18導致的宮頸部感染，從而降低宮頸癌及宮頸癌前病變的發病率［25-26］。但由于疫苗只針對HPV16、HPV18、HPV6、HPV11，對于其他型別的HPV引起的感染未能夠起到很好的預防作用。因此，結合本地區HPV亞型感染頻率，開發新的多價疫苗或通用疫苗才能夠更好的預防HPV感染，降低本地區宮頸癌的發病率。

綜上，本研究分析了廣州地區2013年和2014年女性高危型HPV的總感染率、各年齡段的感染率、各亞型的構成比，為宮頸癌的預防和疫苗的開發提供一定的指導。但由于本研究的對象來于同一家醫院，僅能代表廣州部分人群的的HPV感染情況。在后續的研究中，要加大樣本數量，才能為廣州地區的HPV感染現狀提供更加可靠的理論依據。

作者：陳靜娜 陳麗丹 張衛云 楊永泉 唐榮芝 孫朝暉 李林海 單位：廣州軍區廣州總醫院檢驗科