血清藥理學方法在中藥中進展范文

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血清藥理學是日本學者HirokoIwama［1］在1984年第一屆和漢醫藥學會上首次提出的。1988年，日本國東京都醫院的田代真一［2］正式提出了“血清藥理學”的概念。它是指將中藥或中藥復方經口給動物灌服一定時間后采集動物血液，分離血清，用含有藥物成分的血清進行體外實驗的一種半體內實驗方法。

1990年以后，血清藥理學開始在我國受到從事中藥研究人員的關注。該方法主要針對中藥及其復方復雜多樣的化學成分特點，用含藥血清代替煎劑或粗提物進行體外實驗，它克服了中藥粗制劑直接進行體外實驗的缺點，其結果的可信度明顯優于中藥粗制劑直接用于體外實驗。而且它結合了現代化學、微生物學、分子生物學、藥理、臨床等學科，血清藥理研究方法不斷地被應用于一些中藥及西藥的藥理學研究，并取得了一定的進展。本文就血清藥理學在我國的研究進展、應用、評價及研究展望做一綜述。

1血清藥理學的產生

隨著中藥復方藥理研究的逐步深入，要求研究者把研究水平提高到細胞、亞細胞甚至分子水平，不少科研需要在離體實驗中進行。離體試驗的開展，使中藥復方的研究必須借助一個載體。1984年，在第一屆和漢醫藥學會上，日本學者HirokoIwama提出了給動物灌服中藥，在一定的時間里，用含藥血清代替煎劑或粗提物進行體外實驗的設想。其后，日本國立京都醫院的田代真一，又于1988年和1992年兩次撰文，提出了“血清藥理學”和“血清藥化學”的概念（見圖1），自此有關中藥血清藥理學的研究逐步展開。

2血清藥理學在我國的研究現狀

2．1血清藥理學的時效關系研究

利用含藥血清來評價藥效，何時能夠采集到含藥量較高的血清，找出給藥后的最佳采血時間以避免由于藥效物質代謝消耗或尚未吸收造成的假陰性結果，是非常重要的問題。由于血清中確切的藥效成分并不清楚，因此往往以藥效指標來評判給藥時間和采血時間的優劣，即“時效關系”的研究。研究者們對不同給藥時間和采血時間的藥效進行了研究。

給藥時間上，目前常用的方法有：1次給藥，或間隔2～4h給藥，或每天1～3次，連續3～10d。王寧生［3］認為，根據藥動學理論，固定給藥時間的間隔，相同劑量多次重復給藥后，血漿藥物濃度達到穩態濃度，并將在此濃度下不同采血時間取得的含藥血清進行實驗，均表現較高且相似的藥理作用強度。孟李等［4］對復方丹參血清對中性粒細胞釋放活性氧的影響進行研究，探討含藥血清制備方法的實驗，也證實了此觀點。說明同一給藥方案連續數日給藥較1次給藥有明顯差異，可能與藥物誘導機體產生內源性生物活性物質有關［5］。此結論目前已形成共識。

采血時間上，較理想的采血時間應在血藥濃度的高峰期。蒙一純等［6］認為，根據實驗動物消化生理特點和中藥吸收、生物轉化特點確定采血時間范圍是十分合理的。如大鼠一般1～2h可達血藥濃度峰值，此時血清即為含藥血清；時間延長將有部分藥物成分發生轉化，成為藥物代謝血清。一般采血時間多集中在末次給藥后30min至3h間。由于中藥復方給藥后，不同藥物達峰時間不同，故對于采血時間很難有統一標準。如周明眉等［7］發現，頭風飲給藥后30min的抑制血小板釋放5－HT比給藥后其它時間作用強大，提出給藥后30min為最佳采血時間。李儀奎［8］通過對96個藥物達峰時間統計后提出藥后1～2h采血較為合理。包金鳳等［9］認為應對不同時間分別采血進行預實驗，將不同時間的含藥血清進行比較后再確定采血時間是最可靠和科學的方法。但是，李儀奎等在對大量的中藥藥物代謝動力學參數進行分析后，提出一種通行的方案，即每天給藥2次，連續3d，末次給藥后1h采血，稱為“通法”［10］。這有利于節約財力、人力和時間。

2．2血清藥理學的量效關系研究

給藥劑量目前尚無定論，其量的大小主要取決于：一是動物的給藥量，在一定程度上，給藥量愈大則血清中的含藥量愈高；二是培養體系或反應體系中的含藥血清濃度，血清濃度愈高則藥量愈大。但因含藥血清加入體外反應體系后，濃度被稀釋，使反應體系藥物濃度達不到在體條件下的藥物濃度。王力倩等［11］提出用給藥劑量等于臨床用量乘以動物等體表面積系數、再乘以培養基內血清稀釋度的公式計算制備含藥血清的給藥劑量較為合理。研究表明，含藥血清的量效是由動物給藥量和血清濃度共同決定的，由于培養體系中血清濃度的增減是有限的（血清濃度過高會對細胞產生毒性作用，在研究含藥血清抑制細胞增殖或促細胞凋亡作用時，有可能得出假陽性結果）。楊彥芳等［12］認為應以臨床等效劑量為基準，注意藥物濃度，對于過高劑量（如臨床等效劑量的5倍、10倍）所得到的陽性結果，在作結論時應慎重或留有余地。故相對固定含藥血清濃度，通過改變動物給藥量來調整藥物血清的含藥量，是一種較為現實的方法。

3血清藥理學實驗方法在我國科學研究中的應用

3．1血清藥理學實驗方法在中藥新藥研制中的應用

目前，中藥的開發和研制主要是尋找藥物的有效成分或有效部位、制備精煉的中藥制劑、提高臨床療效和降低毒副作用。血清藥理學實驗方法的建立，使這一目的的實現變得更為切實可行。主要表現在以下幾個方面：①在體外藥理學實驗中，進一步驗證和評價藥物的療效，運用含藥血清對有效藥物和／或藥物的有效成分進行初步篩選；②血清藥理學與血清藥化學、中藥分析化學、中藥藥動學，尤其是中藥胃腸藥動學、中藥血清藥動學、中藥證治藥動學等相結合，將有利于藥物有效成分或部位的尋找和鑒定；③對藥物的制劑工藝進行比較和篩選；④對藥物的作用機理做更深入的研究。

3．2血清藥理學在方劑藥動學（PK）的應用

黃席等將證治方劑藥動學中的復方方劑藥動學修正為復方效應成分動力學假說［13］。其方劑血清靶成分也是探索復方的藥效成分物質基礎的［14］。不僅如此，還研究靶成分在機體內的藥時曲線、數學模型，其PK參數可直接指導臨床用藥，進行治療藥物監測（TDM），從而有力地提高療效，因此是單純方劑藥效物質基礎探索的深入和發展。而血清藥理學［15］研究過程是服用方劑后進行含藥血清的體外藥效學實驗，通過探討與方劑療效相關的成分間接地闡明藥效物質。

3．3血清藥理學方法在腫瘤研究中的應用

離體實驗是研究中藥抗腫瘤機理的重要方法之一。對于抗腫瘤復方中藥來說，在其配伍的多種中藥的血清中的有效成分的定量分析檢測尚未見突破性的進展情況下，血清藥理學方法是抗腫瘤復方研究的一條行之有效的途徑。

目前，此法被廣泛用于中藥抗腫瘤機理研究。研究層面包括腫瘤細胞增殖與細胞周期的調節、腫瘤細胞凋亡及分化的誘導、腫瘤細胞基因表達及端粒酶活性調控等方面。

3．4血清藥理學方法在神經藥理學研究中的應用

神經系統疾病的藥物研究涉及到許多的體外模型，運用這些模型有助于快速、高效地篩選出治療疾病的藥物。合理使用血清藥理學方法，結合疾病的體外模型，可以幫助我們對中藥復方進行分析，可較好地反映中藥藥效。

4對血清藥理學實驗方法的評價

4．1血清藥理學的優勢

血清藥理學因其方法學上的特點使其在中醫學的研究中已顯示出一定的優勢：①從中藥復方本身來講，可克服體外實驗不能直接觀察到的復方經體內胃腸吸收、生物轉化后的綜合整體藥理效應；②從方法學上解決了中藥復方直接應用于離體實驗的難點，使中醫藥研究能在離體實驗中直接與分子生物學技術相結合，從而推動中醫藥現代化的進程；③對含藥血清的成分進行藥效、藥動學研究并與原復方粗提物進行比較，可以發現中藥復方發揮藥效作用的物質基礎，為探討中藥復方作用規律提供新思路；④可以用來驗證一些中醫學的基礎理論。如君臣佐使、中藥配伍理論及一些中醫基礎理論的實際價值，有助于為中醫理論的現代化研究提供依據。

4．2血清藥理研究方法存在的不足

4．2．1在血清藥理研究方法的理論依據方面：該方法建立的理論依據不足主要包括：①從胃腸吸收的中藥有效成分在體內是進入血漿，而非血清；②凝血過程有一系列酶生成，同時刺激白細胞釋放溶酶，這些酶可能降解某些中藥成分；③凝血酶刺激血小板與白細胞釋放大量生物活性物質；④凝血過程伴有纖溶、補體、激肽等系統活化；⑤制備與滅活血清過程會導致中藥成分與中藥介導體內釋放物質損失。使用HPLC－MS指紋圖譜分析與抗白血病細胞增殖實驗表明利用血清藥理方法可能帶來錯誤結論。應加強中藥多層次半體內實驗研究，其中血漿藥理方法可能能避免血清藥理方法的弊病［16］。

4．2．2在血清供體動物的選擇方面：按照血清藥理學的初衷，為較準確地再現在體實驗的整個過程，離體組織（細胞）的供體動物和含藥血清的供體動物須有同質性。除在種屬、年齡、性別、體質量等方面外，供體動物是否造模即是否處于相同的生理病理狀態也是不容忽視的影響因素：①不同生理、病理狀態對血清中含藥成分的影響。科學家們進行了多項比較性研究，揭示出在不同生理、病理或遺傳背景的基礎上，不同人群對同一種藥物的藥代動力學參數有不同的特點；②不同證型對藥物濃度影響。樊亞萱等［17］根據中醫辨證論治理論提出的證治藥動學假說，認為：同一藥物不同“證”的藥代動力學參數經統計學處理有顯著差別，明顯影響藥物療效和毒性反應，經用辨證施治后，差別可消失或減輕。

4．2．3在動物病理模型的制備方面：大多數血清藥理學研究者均采用正常動物的含藥血清。但是，中藥復方進入生理狀態下動物機體與進入病理狀態下的動物，其體內過程是不完全一致的。其消化吸收，體內分布，生物轉化及排泄均可能有差異，也可能產生不同的內源性活性成分。如果研究的是方藥的治療效應，有學者認為，應當采用相應的動物病理模型制備含藥血清，會有較強的說服力［18］。

4．2．4在中藥作用機理方面：中藥作用機理十分復雜。絕大部分的實驗結果均揭示出中藥含藥血清具有一定的藥效，但也有一些研究結果是非常有趣味。例如某些中藥的粗提物無效，而其含藥血清卻有效；而另一些中藥粗提物有效，但其含藥血清卻無效。這些實驗結果從一個側面提示，某些中藥是原藥成分起作用，而有些中藥則可能是其藥物成分在機體作用下形成的代謝產物或藥物的多種成分相互作用后產生的新的生理活性物質在起作用。

5展望

目前，血清藥理學已經應用到越來越多的研究領域中，為中藥復方的研究方法開辟了研究思路，拓寬了研究領域，能較為客觀真實地闡明中藥的藥效和作用機制，并在一定程度上揭示中藥復方在胃腸內代謝過程中活性成分的轉化和改變，提高了體外實驗的可信性和可靠性。但由于血清藥理學方法在我國研究起步較晚，許多方面還需要經驗和數據的累積，且在某些實驗，如凝血、纖溶等研究中采用血清藥理學研究方法不適宜。因此，其局限性不容忽視。血清藥理學若能與血漿藥理學、藥動學、血清藥化學、免疫學、分子生物學、微生物學結合研究，則有助于研究的規范與深入，必將加速中藥走向現代化的進程。

【摘要】血清藥理學是指用含有藥物成分的血清施加于體外實驗反應體系的一種半體內實驗方法。目前已經廣泛運用于對中藥復方的藥理作用和作用機理的探討。本文論述了血清藥理學方法研究的現狀及進展，并結合作者的思路，對中藥藥理學的研究進行展望。

【關鍵詞】血清藥理學；中藥研究；半體內實驗；評價；展望