酶聯(lián)免疫斑點試驗在醫(yī)院護(hù)理的作用范文

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【摘要】目的觀察并分析應(yīng)用T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點試驗(T－SPOT．TB)檢測綜合醫(yī)院護(hù)理人員結(jié)核潛伏感染(LTBI)狀況。方法將我院工齡超過1年的201名護(hù)理人員，其中內(nèi)科、外科、輔助科室分別為82，85，34名。均予以外周血T－SPOT．TB檢測，分析LTBI狀況。結(jié)果所有受檢人員中共有50名T－SPOT．TB檢測結(jié)果為陽性，總潛伏率為26．37%;工作年限不足3年與工作年限≥3年的受檢人員T－SPOT．TB陽性檢出率分別為15．00%與31．40%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且后者陽性檢出率明顯更高(P＜0．05);不同科室中，工作年限≥3年者其陽性檢出率均較工作＜3年者高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。結(jié)論T－SPOT．TB檢測技術(shù)作為新技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床篩查結(jié)核病，具有高靈敏度和特異度，能快速、準(zhǔn)確地診斷結(jié)核病感染，對控制傳染源、降低感染率與提升檢出率均具重要意義，可作為臨床輔助診斷結(jié)核病的重要檢測方式。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫斑點試驗;綜合醫(yī)院護(hù)理人員;結(jié)核潛伏感染

結(jié)核病(TB)為呼吸道傳染病，早期快速診斷已經(jīng)成為控制結(jié)核病的關(guān)鍵因素［1－3］。結(jié)核潛伏感染(LTBI)是宿主雖已被結(jié)核分枝桿菌感染但還未發(fā)病的一種亞臨床狀態(tài)，痰涂片陰性和(或)放射檢查無陽性征象，細(xì)菌成休眠狀態(tài)，故臨床早期診斷該病具有較大難度。機(jī)體免疫力低下時，LTB可發(fā)展成為活動性肺結(jié)核病或其他臟器的結(jié)核病變［4－5］。本研究將T－SPOT．TB應(yīng)用于檢測護(hù)理人員的LTBI現(xiàn)狀，目的在于了解護(hù)理人員結(jié)核分枝桿菌潛伏感染情況以及應(yīng)用T－SPOT．TB檢測LTBI的臨床優(yōu)勢，降低護(hù)理人員結(jié)核病感染概率，避免醫(yī)院交叉感染的發(fā)生?，F(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1．1臨床資料將我院各科室工作超過1年的女性護(hù)理人員共計201名作為研究對象，內(nèi)科組82名中，呼吸、消化、神經(jīng)、腎臟、心臟及內(nèi)分泌科分別為25，21，18，9，7，2名。外科組85名中，心胸外科、骨科、普外科、泌尿外科、神經(jīng)外科分別為29，20，19，10，7名。輔助科室34名中，檢驗科、超聲科、藥劑科、影像科分別為11，12，6，5名。年齡26～44歲，平均(35．1±4．2)歲;上崗年限≥3年121名，＜3年80名。均身體健康，臨床表現(xiàn)及影像學(xué)檢測均未見活動性肺結(jié)核癥狀。排除應(yīng)用免疫抑制劑或增強(qiáng)劑及妊娠女性。1．2方法(1)儀器及試劑。采用T－SPOT．TB(UK)檢測試劑盒，ESCO二級生物安全柜，5%的CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，37℃。(2)外周血T－SPOT．TB試驗。真空采血管中置入肝素抗凝劑并采集每位受檢者5ml的外周靜脈血，混合搖勻并于4h內(nèi)予以外周血單個核細(xì)胞(PBMC)分離。將抗凝全血依據(jù)1:1比例與培養(yǎng)液混合，再依據(jù)(2～3):1比例將被稀釋的血氧漸漸加入至Ficoll淋巴細(xì)胞分離液上，18℃下以每分鐘1000r離心，連續(xù)22min以分離PBMC。予以離心洗滌并做好相關(guān)數(shù)據(jù)記錄，最后將細(xì)胞量調(diào)整到2．5×106/ml。取出T－SPOT．TB培養(yǎng)板，將溫度調(diào)整至室溫并做好標(biāo)識，于每個樣本的板條處分別加入50μl的陰性對照AIM－V與陽性對照(PHA)，抗原A與B各50μL。然后再在4個孔內(nèi)均加入100μL細(xì)胞懸液，置于37℃5%的CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16～20h。按照順序分別加入酶標(biāo)二抗與底物顯色液后形成斑點，借助全自動ELISPOT讀數(shù)儀讀取斑點數(shù)目。1．3結(jié)果判定與觀察指標(biāo)［6］試驗結(jié)果評定:陰性對照斑點數(shù)為0～5個，任何一個檢測孔計數(shù)減去陰性孔計數(shù)≥6個判斷為陽性;如果陰性對照斑點數(shù)≥6個，檢測孔斑點數(shù)≥2倍陰性對照孔斑點數(shù)，判定為陽性。若陰性對照孔斑點數(shù)超過10或陽性對照孔不足20時，則可視T－SPOT．TB結(jié)果不明確需復(fù)查。如果不符合上述標(biāo)準(zhǔn)，且陽性對照孔顯示正常時，測定結(jié)果為陰性［7］。觀察比較不同科室護(hù)理人員T－SPOT．TB檢測結(jié)果及不同工作年限護(hù)理人員T－SPOT．TB陽性結(jié)果。1．4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS16．0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料比較采用χ2或χ2c檢驗。檢驗水準(zhǔn)α=0．05。

2結(jié)果

工作年限＜3年與工作年限≥3年的受檢人員T－SPOT．TB的陽性檢出率分別為15．00%與31．40%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且后者陽性檢出率明顯更高(P＜0．05)。不同科室中，工作年限≥3年者其陽性檢出率均較工作不足3年者高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。

3討論

全國第五次結(jié)核流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果公布，我國感染人數(shù)超過5億，年發(fā)病人數(shù)約130萬，該病呈進(jìn)行性發(fā)展，已成為重要的公共衛(wèi)生問題。有研究表明，LTBI人群中，約5%～10%可轉(zhuǎn)化成活動性結(jié)核病［8］。LTBI處于亞臨床狀況，早期診斷有較大難度。其潛伏期為1～2個月，肺部最易引發(fā)感染，其他部位如頸淋巴、腦膜等。醫(yī)院作為LTBI的重要場所，護(hù)理人員是與病患接觸最為頻繁的高危群體，其感染的可能性較大。臨床當(dāng)前診斷TB的實驗室方法較多，但敏感性與特異性均不盡如人意，應(yīng)用組織病理學(xué)檢測存在創(chuàng)傷且涂片查抄結(jié)核桿菌有較高的漏檢率。而結(jié)核菌素試驗(PPD)篩查法由于我國人群卡介苗接種率較高，假陽性率偏高［9－10］。T－SPOT．TB將特異性抗原靶蛋白6ESAT－6與培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP10)作為刺激原，應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)對是否感染TB進(jìn)行判定。T－SPOT．TB是以T細(xì)胞免疫應(yīng)答和γ干擾素濃度變化為依據(jù)的測量方式。當(dāng)人體初次感染結(jié)核分枝桿菌后，T細(xì)胞受抗原刺激形成致敏的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，當(dāng)人體再次受到該病菌感染時，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞會分泌大量γ干擾素，T－SPOT．TB檢查可借助檢測受試者γ干擾素的濃度變化或單細(xì)胞水平γ干擾素的細(xì)胞數(shù)目，確定結(jié)核分枝桿菌的感染情況［11］。T－SPOT．TB不僅診斷效率、靈敏度較高，還不受機(jī)體免疫抑制，不受分枝桿菌感染條件的影響，試驗操作簡便，費用較低［12－14］。該方法中的兩種抗原已經(jīng)證實均不存在于全部卡介苗菌株及多數(shù)非結(jié)核分期桿菌中，確保了檢測結(jié)果的高特異性，檢測周期僅需在24h內(nèi)完成，且具陽性與陰性對照，能檢測出免疫功能異常者，從而確保了臨床判讀的有效性，檢測結(jié)果也不受是否接種卡介苗的影響。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所有受檢人員中共有53名T－SPOT．TB檢測結(jié)果為陽性，總潛伏率為26．37%;工作年限＜3年與工作年限≥3年的受檢人員T－SPOT．TB陽性檢出率分別為15．00%與31．40%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且后者陽性檢出率明顯更高(P＜0．05);不同科室中，工作年限≥3年者其陽性檢出率均較工作＜3年者高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。由此可知，綜合醫(yī)院護(hù)理人員LTBI率受到工作年限的影響，且工作時間越長受感染的風(fēng)險越大，而所在科室對其感染風(fēng)險影響較小。綜合性醫(yī)院雖與TB患者無密切接觸，但也應(yīng)加強(qiáng)對護(hù)理人員進(jìn)行LTBI的防控，尤其關(guān)注工作年限較長的護(hù)理人員?？傊Ｓ玫慕Y(jié)核病實驗室的診斷方法難以滿足臨床早期確診結(jié)核病的需要，T－SPOT．TB檢測具有高靈敏度和特異度，能快速、準(zhǔn)確地診斷結(jié)核病感染，對控制傳染源，降低感染率與提升檢出率均具重要意義，可作為臨床輔助診斷結(jié)核病的重要檢測方式。

作者：周家仙 張偉芬 周桂嬌