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【摘要】目的建立益腎養元合劑的質量控制標準。方法采用薄層色譜法鑒別益腎養元合劑中的何首烏、金櫻子、狗脊；采用高效液相色譜法測定益腎養元合劑中二苯乙烯苷的含量。結果在薄層色譜中檢出了何首烏、金櫻子、狗脊；二苯乙烯苷進樣量在25.82～826μg范圍內呈良好的線性關系（r＝1.0000），平均回收率為102.0%，RSD為0.83%（n＝6）。結論本方法操作簡便、專屬性強、準確、重復性好，可作為益腎養元合劑的質量控制標準。
【關鍵詞】益腎養元合劑何首烏金櫻子狗脊薄層色譜法二苯乙烯苷高效液相色譜法
益腎養元合劑收載于衛生部藥品標準第二十冊,具有補益肝腎、健脾益氣、澀精止遺的功效，用于肝腎不足、脾氣虛弱、面色萎黃、倦怠納差、腰膝酸痛、遺精夢泄等［1］。
方中何首烏為主藥，原藥品標準中僅收載了化學鑒別、狗脊藥材的薄層鑒別和2，3，5，4′?菜聶腔?二苯乙烯??2??O?撥陋?D?財咸煙擒眨ㄒ韻錄虺啤岸?苯乙烯苷”）的含量測定方法。本文為進一步提高該品種的質量標準，增加了方中何首烏、金櫻子的薄層鑒別，并對原標準中的狗脊薄層鑒別和二苯乙烯苷含量測定方法進行了改進，報道如下。
1儀器與試藥
益腎養元合劑（批號：C08001A、C08002A、C08003A、F03001B）均為廣州潘高壽藥業股份有限公司產品；何首烏對照藥材（批號：120934??200507）、金櫻子對照藥材（批號：1047??9701）、狗脊對照藥材（批號：121071??200502）及二苯乙烯苷（批號：0844??200003）均購自中國藥品生物制品檢驗所；硅膠G預制板由青島海洋化工公司生產；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。
Agilent1200高效液相色譜儀，色譜柱（AgilentEclipseXDB??C184.6mm×150mm,5μm），梅特勒十萬分之一天平。
2薄層鑒別
2．1何首烏的鑒別
取本品20mL（批號：C08001A、C08002A、C08003A），加乙酸乙酯20mL，振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材0.25g，加乙酸乙酯50mL，超聲處理15min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取不含何首烏的陰性樣品，同法制成陰性對照溶液。吸取上述3種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯?慘宜嵋陰オ布姿幔ㄌ寤?比5∶5∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。再噴以磷鉬酸濃硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的藍色斑點。陰性對照無干擾，見圖1。
1～3.供試品溶液；4.對照藥材溶液；5.陰性對照溶液
圖1何首烏的TLC圖（A.紫外光燈365nm下;B.日光下）（略）
Figure1TLCofRadixPolygoniMultiflori(A.underultravioletlightat365nm;B.underthesunlight)
2.2金櫻子的鑒別
取金櫻子對照藥材7g，加水50mL，煎煮30min，濾過，濾液濃縮至20mL，另取不含金櫻子的陰性樣品20mL，按“2.1”項下的供試品溶液的制備方法分別制備對照藥材溶液和陰性對照溶液。吸取“2.1”項下的供試品溶液及上述2種溶液各6～10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以乙酸乙酯?布狀吉菜?（體積比9∶0.8∶0.6）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的藍色主斑點。陰性對照無干擾，見圖2A。
2.3狗脊的鑒別
取狗脊對照藥材3g，加水50mL，煎煮30min，濾過，濾液濃縮至20mL，另取不含狗脊的陰性樣品20mL，按“2.1”項下的供試品溶液的制備方法分別制備對照藥材溶液和陰性對照溶液。吸取“2.1”項下的供試品溶液及上述2種溶液各4μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷?脖?酮?布姿幔ㄌ寤?比4∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%氫氧化鈉乙醇溶液，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照無干擾，見圖2B。
1～3.供試品溶液；4.對照藥材溶液；5.陰性對照溶液
圖2金櫻子(A)和狗脊（B）的TLC圖（略）
Figure2TLCofFructusRosaeLaevigatae（A）andRhizomaCiboth(B)
3含量測定
3.1色譜條件
色譜柱：AgilentEclipseXDB??C18（4.6mm×150mm,5μm），流動相：甲醇??4%(體積分數)醋酸溶液（體積比20∶80）；流速：1.0mL/min，檢測波長：320nm，柱溫：室溫，進樣量：20μL。理論塔板數以二苯乙烯苷峰計應不低于2000。
3.2溶液的制備
3.2.1對照品溶液的制備精密稱取二苯乙烯苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，精密量取1mL，置10mL棕色量瓶中，加流動相至刻度，即得。
3.2.2供試品溶液的制備精密量取本品2mL，置50mL棕色量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。
3.2.3陰性對照溶液的制備取不含何首烏的陰性樣品，按“3.2.2”項方法制成陰性對照溶液。
3.3專屬性試驗
分別取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照溶液，按上述色譜條件測定，結果陰性對照對二苯乙烯苷的測定無干擾，說明方法專屬性強。見圖3。
A.對照品；B.樣品；C.陰性
圖3HPLC圖（略）
Figure3HPLCchromatograms
3.4線性關系的考察
精密稱取二苯乙烯苷對照品適量，加流動相制成質量濃度為1.291、2.581、5.163、10.325、20.650、41.300μg/mL的溶液，分別吸取20μL，按上述色譜條件測定，以峰面積(A)對對照品溶液質量濃度（ρ）進行回歸，得回歸方程A=83.0053ρ+2.6012，表明二苯乙烯苷進樣量在25.82～826μg范圍內呈良好的線性關系（r＝1.0000）。
3.5穩定性試驗
精密吸取同一批供試品溶液各20μL，按上述色譜條件，每隔1h測1次峰面積，結果其RSD值為1.20%，表明二苯乙烯苷在7h內穩定。
3.6重復性試驗
取同一批樣品（批號：F03001B）共6份，分別按上述方法測定二苯乙烯苷的含量，結果其RSD值為0.25%,表明方法重現性良好。
3.7回收率試驗
分別精密吸取已知含量的本品1批（批號：F03001B，含量為0.2153mg/mL）1mL6份，分別精密加入二苯乙烯苷對照品溶液（0.2118mg/mL）1mL，按“3.2.2”項方法制得供試品溶液，測定二苯乙烯苷含量，計算平均回收率為102.0%，RSD為0.83%。結果見表1。
3.8樣品的測定
取3批樣品（批號：C08001A、C08002A、C08003A），分別按“3.2.2”項方法進行測定，結果樣品中二苯乙烯苷的含量分別為：0.1821、0.1968、0.1547mg/mL。
4討論
4.1本文采用的方法盡可能與藥典中相應的藥材薄層鑒別方法一致，并依據產品的實際情況進行了展開條件的優化。何首烏采用藥典中的苯?慘掖頰箍?系統時，背景影響大，特征熒光斑點易被掩蓋；經摸索發現，采用本文的方法，熒光斑點清晰，陰性無干擾。根據文獻［2，3］中的狗脊藥材的鑒別方法操作，發現特征斑點熒光較弱，易受干擾，經摸索發現，用質量分數5%NaOH乙醇溶液進行顯色，其特征點熒光強度加強，利于觀察，較原方法提高了特征斑點檢出的靈敏度。新晨
表1回收率試驗結果（略）
br1Recoveryresults
4.2薄層色譜法鑒別時,分別用自制板及預制板同時展開、不同的溫度或濕度環境下展開，層析結果表明：自制板與預制板的層析結果差別無顯著性，不同的溫度和濕度的環境下展開均可檢出何首烏、金櫻子、狗脊等藥材特征斑點。本方法采用同一供試品溶液進行了4種藥材的薄層鑒別（補骨脂的鑒別條件與藥典一致，本文不再報道），操作非常簡便。
4.3由于二苯乙烯苷化學性質不穩定，需避光操作，原標準采用萃取和蒸干的操作［3］，操作步驟多，操作過程中二苯乙烯苷易損失，本文采用直接稀釋法進行樣品處理，操作簡單、快速、準確。曾使用流動相甲醇?菜?（體積比25∶75）［4］，但有一小峰與主峰分離較差，采用本文所述的流動相，分離度符合藥典要求。
4.4曾考察了Dikmakromasil、ApolloC18和AgilentEclipseXDB??C183種色譜柱對同一批號樣品（批號：F03001B）的影響,結果3種色譜柱的測定結果基本一致，表明本法的耐用性好。
【參考文獻】
［1］WS3－B－3971－98.國家藥品標準:衛生部藥品標準第二十冊［S］.1998:290.
［2］李光喜.首烏補汁的薄層色譜鑒別［J］.廣東藥學院學報，2003，19（1）:10-11.
［3］國家藥品監督管理局.國家中成藥標準匯編(內科氣血津液分冊)［M］.北京：化學工業出版社，2002：573.
［4］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典:一部［M］．北京：化學工業出版社，2005．122.