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【摘要】目的研究玉郎傘多糖（yulangsanpolysaccharides,YLSPS）的抗抑郁作用。方法采用懸尾實(shí)驗(yàn)（TST）和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）觀察YLSPS對(duì)小鼠不動(dòng)時(shí)間的影響，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定小鼠腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、五羥色胺（5-HT）的含量。結(jié)果600mg/kgYLSPS能明顯縮短小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間，300，600mg/kgYLSPS能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間。與空白組相比，300，600mg/kgYLSPS顯著提高了小鼠腦中NE、DA和5-HT的濃度（P<0.05）。結(jié)論YLSPS對(duì)“行為絕望”動(dòng)物模型有明顯的抗抑郁作用，其機(jī)制可能與其提高腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】玉郎傘多糖；抗抑郁；懸尾實(shí)驗(yàn)；強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)；單胺類神經(jīng)遞質(zhì)
玉郎傘是一種尚未開發(fā)的廣西習(xí)用壯藥,為蝶形花科植物疏葉崖豆MillettiapulchraKurzvar.laxior(Dunn)Z.Wei的塊根，具有舒筋活絡(luò)、補(bǔ)虛潤(rùn)肺之功能，民間用于腰腿痛、風(fēng)濕痛和慢性肝炎，也用于智力減退、消化不良、營(yíng)養(yǎng)不良和病后虛弱等治療。玉郎傘多糖（yulangsanpolysaccharides,YLSPS）是玉郎傘提取物中主要的有效成分,由葡萄糖和阿拉伯糖組成［1］。本課題組前期研究表明，YLSPS具有護(hù)肝、抗自由基、抗癡呆等作用［2～4］。本文對(duì)YLSPS的抗抑郁作用進(jìn)行了初步研究。
1材料與儀器
1.1動(dòng)物昆明種小鼠，SPF級(jí)，♂，體重18～22g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（桂）2003-0003。動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，自由飲水和取食。
1.2實(shí)驗(yàn)藥物YLSPS由本室自行提取；鹽酸氟西汀膠囊（fluoxetine，F(xiàn)LU，批號(hào)：071201，上海中西制藥有限公司）。實(shí)驗(yàn)前將各試藥用蒸餾水配成所需濃度，4℃冷藏備用。
1.3儀器與試劑TGL-16G-A冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；MK3酶標(biāo)儀（ThermoElectronCorporation）；FJ-200高速均質(zhì)分散機(jī)（上海標(biāo)本模型廠）；HH-W21-Cr600電熱恒溫水溫箱（北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠）；開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱（高50cm，長(zhǎng)80cm，寬80cm，底面平均劃分為16格面積相等的格子）自制；懸尾實(shí)驗(yàn)觀察箱（高35cm，長(zhǎng)25cm，寬25cm）自制；秒表；去甲腎上腺素試劑盒（美國(guó)ADL公司，批號(hào)：RT110371）；多巴胺試劑盒（美國(guó)ADL公司，批號(hào)：RT110371）；五羥色胺試劑盒（美國(guó)ADL公司，批號(hào)：RT110371）。
2方法
2.1小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成5組：空白組，F(xiàn)LU（20mg/kg）組，YLSPS低、中、高劑量（150，300，600mg/kg）組。每日上午8時(shí)灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7d。末次給藥30min后將小鼠尾末端2cm處固定倒懸于自制懸尾箱內(nèi)，頭部離箱底約5cm，觀察6min，記錄后4min內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。判定不動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)：小鼠在空中停止掙扎，身體呈垂直倒懸狀，靜止不動(dòng)。
2.2小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)分組和給藥同懸尾實(shí)驗(yàn)。末次給藥30min后將小鼠單獨(dú)置于高20cm，直徑14cm，水深10cm，水溫25℃的圓形玻璃缸內(nèi)，玻璃缸之間放一個(gè)不透明隔板，以防小鼠彼此看到，觀察6min，記錄后4min內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。判定不動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)：小鼠在水中停止掙扎，或呈漂浮狀態(tài)，僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面。
2.3開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)分組和給藥同懸尾實(shí)驗(yàn)。末次給藥30min后將小鼠放入自制開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱中，適應(yīng)1min后，記錄動(dòng)物5min內(nèi)由底面中心開始走動(dòng)的穿越格數(shù)。
2.4酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平“小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)”測(cè)試結(jié)束后立即將小鼠斷頭，在冰臺(tái)上迅速取全腦，稱重，腦組織加入5倍量（重量/體積）預(yù)冷生理鹽水，低溫均漿，14000r/min冷凍高速離心15min，取上清，置-86℃冰箱保存，以供單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量測(cè)定。50μl上清液和10μl生物素標(biāo)記液加入預(yù)先包被一抗的96孔酶標(biāo)板，加入100μl酶標(biāo)記液，（36±2）℃孵育反應(yīng)60min，甩盡反應(yīng)液，洗板6次，每孔加入底物A、B液各50μl，37℃避光孵育反應(yīng)15min，加入50μl終止液，終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處各孔的OD值。同時(shí)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品OD值，以O(shè)D值為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從坐標(biāo)曲線查得各樣本濃度。
2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù)用以±s的形式表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,選用單因素方差分析（ANOVA）來檢驗(yàn)各組數(shù)據(jù)之間的差異性。
3結(jié)果
3.1YLSPS對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間的影響與空白組相比，600mg/kgYLSPS能明顯縮短小鼠TST、FST的不動(dòng)時(shí)間（P<0.01）。300mg/kgYLSPS能明顯縮短小鼠FST的不動(dòng)時(shí)間（P<0.05），提示YLSPS具有一定的抗抑郁作用。結(jié)果見表1。表1YLSPS對(duì)小鼠懸尾和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響（略）
3.2YLSPS對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響YLSPS各劑量組小鼠的自主活動(dòng)與空白組比較無明顯差異，表明該藥對(duì)小鼠自主活動(dòng)無顯著影響。結(jié)果見表2。表2YLSPS對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響（略）
3.3YLSPS對(duì)小鼠腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響
FLU可以顯著增加腦中5-HT的含量，而對(duì)NE和DA沒有顯著影響。300，600mg/kgYLSPS可以顯著提高腦中NE、DA和5-HT的水平。結(jié)果見表3。表3YLSPS對(duì)小鼠腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響（略）
4討論
抑郁癥是一種由各種原因引起的以抑郁為主要癥狀的一組心境障礙或情感性障礙，其主要臨床表現(xiàn)為情緒低落，消極待物，無助感，精力及注意力下降等。抑郁癥發(fā)病機(jī)制甚為復(fù)雜，誘發(fā)原因較多。目前多數(shù)人認(rèn)可去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)等神經(jīng)遞質(zhì)可能參與抑郁癥的神經(jīng)生化機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，5-TH功能降低會(huì)導(dǎo)致人們心境抑郁、食欲減退、失眠、焦慮不安、性功能障礙、不能應(yīng)付應(yīng)激、活動(dòng)減少等癥狀［5］。NE不足導(dǎo)致注意力難以集中，情感抑郁，工作記憶障礙等精神癥狀。臨床上對(duì)抑郁癥的治療主要是直接或間接增加突觸間隙中NE和5-HT。
小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）是由Porsolt于1977年首先提出，小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)（TST）是受FST的啟發(fā)而創(chuàng)建的。FST和TST是兩個(gè)經(jīng)典的抗抑郁劑評(píng)價(jià)模型，各提供了一個(gè)無可回避的壓迫環(huán)境。實(shí)驗(yàn)中小鼠最初表現(xiàn)為掙扎、試圖逃脫，一段時(shí)間后呈不動(dòng)狀態(tài)，反映了一種被稱之為“行為絕望和扭曲(behavioraldespairandvariant)”或“對(duì)強(qiáng)壓環(huán)境適應(yīng)的失敗(failuretoadapttostress)”狀態(tài)。FST和TST兩種行為絕望模型對(duì)絕大多數(shù)抗抑郁藥敏感，操作簡(jiǎn)單、快捷，被廣泛用于該類藥物的初篩。
本文以這兩個(gè)模型為基礎(chǔ)，對(duì)YLSPS的抗抑郁作用進(jìn)行初步研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，YLSPS能顯著縮短小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間，顯示了一定的抗抑郁作用。開野實(shí)驗(yàn)中各劑量YLSPS對(duì)小鼠自主活動(dòng)均無顯著影響，提示其抗抑郁作用與中樞興奮性作用無關(guān)，故可排除其假陽(yáng)性結(jié)果的可能性。與空白組相比，連續(xù)給藥7d后，300、600mg/kgYLSPS能顯著提高腦中NE、DA、5-HT的水平，與本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)一致［6］。鑒于此，我們推測(cè)YLSPS可能是通過直接或間接升高腦內(nèi)突觸間隙中NE、DA、5-HT水平而發(fā)揮抗抑郁作用的，其確切神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。新晨：
【參考文獻(xiàn)】
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