血清脂蛋白范文

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在國外，脂蛋白電泳方法已商品化，在分析速度精度等方面均可滿足常規應用。參照有關方法和技術[1,5]，我們得到了一種適合于國內常規應用的脂蛋白電泳的快速分析法。

1材料和方法

1.1使用試劑

1.1.1電極緩沖液巴比妥鈉25mmol/L，乙二胺四乙酸二鈉0.94mmol/L,以1.0mmol/LHCI調Phg至8.6。

1.1.2凝膠緩沖液：巴比妥鈉30mmol/L，乙二胺四乙酸二鈉0.94mmol/L，蔗糖146mmol/L，1.0mol/LHCL調pH至8.6（含聚乙烯吡咯烷酮K-605g/L）。

1.1.35g/L瓊脂糖凝膠，以凝膠緩沖液制備并分裝后，貯于4℃。

1.1.470g/L白蛋白溶液（北京化工廠）。

1.1.5染色貯備液脂肪紅7B0.6mmol/L，溶于無水甲醇中。

1.1.6染色應用液取貯液5ml，滴加0.1mol/LNaOH1.0ml，用前制備。

1.1.7漂染液甲醇：水＝5:2（V/V）

1.2操作方法

1.2.1凝膠片制備取無色透明的投影膠片（0.1mm），切成80×110mm，放于水平臺面上用一內徑為70×95mm的有機玻璃邊框壓在其上，將加熱融化的瓊脂糖冷至50～60℃，加白蛋白至終濃度約為2g/L，混合，輕輕鋪于膠片上，使膠厚度為1mm左右，膠凝固后小心去除邊框。

1.2.2加樣用自制加樣器制備樣品槽[6]，加入血清樣品3～5μl。

1.2.3電泳膠片放入預冷至4～8℃的電泳槽支架上，以四層濾紙與電極緩沖液連接，每個膠片恒流40Ma，電泳至區帶展開約30mm（約需20分鐘，加或不加指示染料）。

1.2.4染色膠片取出，于65℃左右烘干（約40分鐘），放于水平盒中，加入新配的染色液覆蓋整個膠片表面，放3～5分鐘（可據室內溫度而定）。

1.2.5漂洗與干燥除去膠片表面的染色液，浸入漂洗液中，輕輕搖動30秒，如所用漂洗液較少，可再換一次漂洗液洗30秒，轉入65℃左右干燥（約10分鐘）。

1.2.6掃描測定膠片點樣面向下放入掃描載板上，用軟紙蘸少量水輕輕擦去膠片背面的污跡，在520nm附近掃描測定。

2結果和討論

方法所得圖譜清晰，區帶平整，β-與前β-帶分離較好，底色對測定基本無干擾，原點區無明顯染料積存

用本法測定146例健康人，所得參考值范圍（均值±SD）分別是：52.2±5.4%、pre-β13.1±5.8%、α34.0±5.6%，與有關資料結果相近[2,4,5]。

脂蛋白帶在電泳過程中易擴散和拖尾，本方法加入了一定濃度的蔗糖和白蛋白，保證了區帶的平整，同時，在電泳時加大電場強度，使電泳在短時間內完成，區帶可擴散的機會降低，所得區帶較密集。應該指出，電場強度的加大，電泳過程中產熱加快，因而在室溫較高時，采用了將電泳槽預冷的方法，以減少過熱造成脂蛋白帶的分解。白蛋白濃度在2～5g/L間均可獲良好結果。

β-與前β-帶的分離好壞是脂蛋白電泳是否成功的關鍵技術問題，本方法用較低離子強度的緩沖液，降低膠濃度，并采用上述使區帶密集的方法，較好地解決了這一問題。

染色中用新制備染料及用我們的方法制備加樣槽可保證在原點區基本無干擾。由于染色液對脂蛋白較為敏感，對于高脂血樣品在加樣量要適當減少，否則區帶的分辨率會下降，甚至導致錯誤的分型結果。

凝膠所用的支持體廉價易得，操作方便，有很好的本底重復性，并使結果靈活地長期保存成為可能。

經過實驗認為，本方法快速、靈敏，適于大批量樣品（至少每次20個）操作，適于在常規實驗室應用，特別是對于脂蛋白測定的商品化將有所幫助。