針灸血清對乳腺癌MCF范文

本站小編為你精心準備了針灸血清對乳腺癌MCF參考范文，愿這些范文能點燃您思維的火花，激發您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

作者：李巖郭剛李彬史秀芳

【摘要】目的：觀察針灸對乳腺癌細胞凋亡及細胞周期的影響。方法：針灸刺激雌性Wistar大鼠雙側足三里、三陰交、內關穴，抽取大鼠“針灸血清”分別與MCF7細胞混合培養，分為電針組、艾灸組和對照組。MTT法檢測細胞生長情況，72h后流式細胞技術檢測細胞凋亡率及Fas表達率。結果：MCF7細胞Fas表達率明顯增高，72h達57.70%；MCF7細胞生長受到明顯抑制，12h、24h、72h抑制率分別達17.55%、24.71%和31.85%；作用72h后的細胞凋亡率分別為1.07%、8.72%、10.18%,與艾灸組相近，均明顯高于對照組（P＜0.05）。結論：“針灸血清”作用于MCF7細胞可能通過增加Fas的表達率來誘導細胞凋亡。

【關鍵詞】針刺・灸法・乳腺腫瘤・細胞凋亡・細胞周期

TheeffectofacupuncturalandmoxibustionaltherapyontheapoptosisofbreastcellMCF7

【ABSTRACT】Objective:ToobservetheeffectontheapoptosisofbreastcancercellMCF7withacupuncturalandmoxibustionaltherapy.Methods:ZusanliandSanyinjiaoneiguaninbothsidesoffemaleWistarmicewereacupuncturedandmoxibusted.MCF7cellwascultiratedwiththeserum.TodetectethecytoxicitywithMTT,anddetectetheapoptosicrateandFasexpressionratewithflowcytometryafter72hours.Results:TheFasexpressionwasobviouslyincreasedupto57.70%after72h.TheproliferationofMCF7wasinhibitedremarkably.Theinhibitionratewere17.55%,24.71%and31.85%after12h,24hand72h.Theapoptosicratewere8.72%and10.18%after72h,remarkablyhigherthanthecontrolgroup(P＜0.05).Conclusion:AcupuncturalandmoxibustionalserumcouldincreaseFasexpressionratetoinhibitproliferationofMCF7cellandinduceitsapoptosis.

【KEYWORDS】Acupuncture・Moxibustion・BreastNeoplasms・Apoptosis・Cellcycle

乳腺癌在我國的發病率不斷增高，尋找有效的治療方法具有深遠的意義［1］。針灸在一定程度上能抑制腫瘤的生長，對惡性腫瘤具有一定的治療作用，可緩解臨床癥狀，減輕放、化療后的副反應，改善機體免疫功能，提高患者的生活質量。針灸腧穴而采集的“針灸血清”是近年來針灸研究中提出的一種新的研究思路和方法。本文通過應用針灸血清培養乳腺癌細胞mcf7，觀察針灸對乳腺癌細胞凋亡情況及細胞周期的影響，為尋找針灸治療乳腺癌的途徑和方案以及為探討針灸抑瘤機制提供線索。

1材料與方法

1.1材料乳腺癌細胞株MCF7由山東中醫藥大學細胞室提供。雌性Wistar大鼠30只，體重250g左右，由山東大學醫學院動物實驗室提供。RPMI1640購自美國GIBCO公司，新生小牛血清購自杭州四季青生物工程材料研究所，二甲基亞砜分析純購自北京亞太精細化工公司，MTT購自SIGMA公司，Fas、異硫氫酸熒光素（FITC）標記的單克隆抗體IgG1及免疫陰性對照品IgG1FITC均為美國Pharmingen公司產品，由北京岳泰生物公司提供。FACScan型流式細胞儀為美國BD公司產品。

1.2方法

1.2.1針灸血清的制備［1］選用雌性健康Wistar大鼠30只，隨機分為空白對照組、電針組和艾灸組各10只。電針組和艾灸組分別用電針和艾灸的治療方法在相當于“足三里”、“三陰交”和“內關”穴的部位進行治療，電針組選用30號40mm毫針，直刺20~30mm，得氣后接MODELD68051型電針治療儀，選用連續波，留針20min。艾灸組用雀琢灸法灸穴位20min，連續6d，每天2次，在最后一次治療結束后1h，乙醚吸入麻醉，腹主動脈取血，無菌分離血清，經56℃、30min滅活處理后，置-20℃冰箱備用。

1.2.2細胞培養MCF7細胞株培養于RPMI1640培養液中，置37℃，5%CO2（體積比，下同）和飽和濕度下的培養箱中培養，2~3d胰酶消化傳代1次，當細胞傳至第4代、細胞生長良好、狀態穩定時，用胰蛋白酶消化后，以2×105/cm2的密度重新種入30mm的6孔培養皿上，于37℃和5%CO2培養箱中培養24h。第2天用磷酸鹽緩沖溶液（PBS）將細胞清洗2次，分別加入正常鼠血清、電針鼠血清、電針鼠血清繼續培養72h。

1.2.3MTT法檢測MCF7細胞抑制率取對數生長期的MCF7細胞，胰酶分散計數，用RPMI1640培養液調整細胞濃度為1×105/ml，按每孔200μl接種于96孔板中（每孔細胞數為2×104個），置于37℃、5%CO2和飽和

濕度下的培養箱中培養24d，貼壁后倒掉RPMI1640培養液，分為對照組和實驗組，每一組設3個平行孔，分組如下：對照組（RPMI1640培養液中含10%正常鼠血清），電針組（RPMI1640培養液中含10%電針鼠血清），艾灸組（RPMI1640培養液中含10%艾灸鼠血清）。每一組分別加入血清200μl，再置培養箱中分別培養12h、48h、72h后，每孔加入5mg/mlMTT20μl，繼續培養4h后，終止培養。小心吸棄孔內培養上清液，每孔加入二甲基亞砜150μl，振蕩至結晶完全溶解，于酶聯免疫檢測儀上測定490nm波長的吸光度（A值），計算抑制率，由抑制率說明針灸血清對人乳腺癌MCF7細胞株的敏感性。抑制率（%）=（對照組A值-含藥血清組A值）/對照組A值×100%。

1.2.4流式細胞儀檢測細胞凋亡和細胞周期變化取對數生長期的細胞，用0.25%胰酶消化經加入以上各組血清培養72h后的貼壁細胞，收集細胞數目分別約5×105，1000r/min離心5min，棄去培養液。經PBS漂洗2次后，加入冰預冷的70%乙醇固定，4℃過夜。然后除去固定液，用3mlPBS溶液重懸細胞5min，1000r/min離心5min，棄去PBS溶液，加入PC緩沖液50μl，靜置20min，再加入100μg/mlPI液10μl，PBS溶液480μl，室溫避光30min后上流式細胞儀檢測，Modifit軟件（BD公司提供）分析數據。

1.2.5流式細胞儀檢測Fas表達取對數生長期的細胞，胰酶消化計數，37℃、5%CO2箱中培養24h，至細胞生長旺盛貼壁后，去掉培養液，分別加入以上各組血清培養液于CO2培養箱中繼續培養72h。然后分別胰酶消化后離心，每支離心管中加入70%乙醇固定細胞，以PBS液漂洗2次后，再離心（1500r/m，5min）。取細胞懸液500μl，加入異硫氫酸熒光素標記的鼠抗人的單克隆抗體IgG1工作液20μl，另各取一支陰性對照品IgG1FITC，室溫避光反應30min后，由流式細胞儀熒光檢測。

2結果

2.1針灸對細胞抑制率的影響見表1。由表1可見，針灸大鼠血清對乳腺癌MCF7細胞的抑制率呈時間依賴性，電針組和艾灸組均能明顯抑制MCF7細胞增殖（P＜0.05），但電針組的抑制率高于艾灸組（P＜0.05）。表13組血清在不同時間段對MCF7細胞的抑制率（略）

2.2針灸對細胞凋亡和細胞周期變化的影響見圖1~3，表2。各血清作用72h后，直方圖中均可見G0/G1期峰前的亞二倍體峰即凋亡峰，代表凋亡細胞群，以峰值高低代表凋亡細胞的比例。圖1、2、3顯示對照組、艾灸組和電針組的凋亡率分別為1.07%、8.72%、10.18%。由表2可以看出，各血清作用72h后，S期和G2/M期細胞數均明顯減少（P＜0.05），對照組、艾灸組和電針組的凋亡率分別為1.07%、8.72%、10.18(P＜0.05)。針刺和艾灸都能抑制MCF7細胞增殖，且兩者差異沒有統計學意義（P＞0.05）。由表3可以看出，電針組和艾灸組大鼠血清對Fas的表達率明顯高于對照組（P＜0.05），但電針組與艾灸組對Fas表達率的影響差異無統計學意義（P＞0.05）。表23組MCF7細胞血清作用72h后細胞周期變化（略）表33組血清作用72h后MCF7細胞Fas表達

3討論

誘導腫瘤細胞凋亡是治療腫瘤的一種新的思路，而且治療腫瘤的有效性主要表現在腫瘤細胞生長抑制和/或誘導凋亡［2，3］。本實驗表明“針灸血清”能抑制乳腺癌MCF7細胞生長。“針灸血清”是近年來針灸研究中提出的一種新的研究方法，是指從針灸處理后的人或動物體上采集到的血清，作為效應物質加入到另一個反應系統中，同在體或離體器官組織、細胞或分子靶目標接觸，通過它們的功能或形態學的改變，直接地觀察針灸處理后的效應［4，5］。“針灸血清”研究方法可歸納為離體實驗和在體實驗兩大類。本實驗針灸大鼠血清離體作用于人的腫瘤細胞株，結果發現，針灸刺激Wistar大鼠雙側足三里、三陰交、內關穴后的大鼠“針灸血清”能使MCF7細胞抑制率升高，說明可以抑制體外腫瘤細胞生長。與正常對照組比較，MCF7細胞S期和G2M期百分率均明顯降低，說明針灸血清能影響乳腺癌MCF7細胞增殖，抑制其生長。細胞凋亡在腫瘤發生、發展、轉化和治療過程中具有重要意義，許多抗腫瘤藥物是通過誘導細胞凋亡而發揮作用的。本實驗研究顯示，針灸刺激大鼠雙側足三里、三陰交、內關穴，此大鼠“針灸血清”能誘導乳腺癌MCF7細胞凋亡。其機制可能是針灸腧穴后，通過某種內在的生理調節機制，引起血清中Fas的表達率增高，從而誘導乳腺癌MCF7細胞凋亡，發揮抑制腫瘤的作用。針灸療法能促使經絡暢通，氣血調和，改善機體免疫功能，可產生不同程度的類藥性作用。從這個角度講，似可把針灸穴位比喻為“藥物”，不具備藥的外在形態卻具有藥的某種作用實質，這是針灸療法最本質的特征之一。“針灸血清”可直接觀察其功能或實驗物形態學的改變，有利于拓寬針灸研究的領域，推動針灸作用及其機理研究，尋求一條治療惡性腫瘤的獨特道路。

參考文獻

［1］唐漢鈞.乳腺癌的中醫臨床與實驗研究［J］.中醫藥學刊，2003，21（2）：168172.

［2］ElsmerEWilliamsonEAZangandC,etal.NoveltherapeuticapproachligandsforPPARaandretinoidreceptorsinduceapoptososinbcl2positivehumanbreastcancercells［J］.BreastCancerResTreat,2002,74(2):155165.

［3］孫研琳，周庚寅.RNA干擾及其在乳腺癌研究中的應用［J］.中國現代普通外科進展，2005，8（4）：193195.

［4］陳漢平.東南久矣要張機――再談“針灸血清”研究［J］.上海針灸雜志，2002（1）：20.

［5］孫德利，陳

漢平.“針灸血清”的研究方法及意義［J］.浙江中醫學院學報，1999（3）：59.新晨