力爾凡聯(lián)合順鉑對(duì)惡性腹腔積液臨床療效及端粒酶活性范文

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作者：崔京遠(yuǎn)馬紅崔秋娟周東風(fēng)林惠忠

【摘要】目的：探討力爾凡對(duì)惡性腹腔積液的臨床治療價(jià)值及對(duì)端粒酶活性的影響。方法：48例惡性腹腔積液患者分為治療組和對(duì)照組。治療組（28例）采用力爾凡聯(lián)合順鉑腹腔內(nèi)注入，對(duì)照組（20例）單用順鉑腹腔內(nèi)注入。分別在治療前，治療后1周、2周及3周，觀察腹腔積液消失情況，評(píng)定療效，采用半定量TRAP銀染法檢測(cè)腹水細(xì)胞端粒酶活性。結(jié)果：治療組臨床治療有效率89.3%，對(duì)照組為60.0%（P＜0.01），隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，端粒酶活性逐漸下降。結(jié)論：力爾凡聯(lián)合順鉑治療惡性腹腔積液具有協(xié)同作用，其對(duì)端粒酶活性的抑制可能參與了以上機(jī)制，檢測(cè)端粒酶活性可作為評(píng)價(jià)其療效的敏感生物學(xué)指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】力爾凡・順鉑・腹水・端粒，末端轉(zhuǎn)移酶

TheeffectofLifeincombinedwithcisplatinonmalignantascitesandtelomeraseactivity

【ABSTRACT】Objective:Tostudytheclinicalvalueandtelomeraseactivityofmalignantascitestreatedbylifeincombinationwithcisplatin.Methods:48patientswithmalignantascitesweredividedrandomlyintotwogroups.Treatmentgroupof28casesweretreatedwithlifeinandcisplatin,controlgroupof20casesweretreatedwithcisplatinalone.TelomeraseactivitywasdetectedbysemiTRAPassaybeforetreatment,atthefirstweek,thesecondweekandthethirdweekaftertreatment,respectively.Results:theeffectiveratesoftreatmentgroup(89.3%)wasmuchhigherthanthatofcontrolgroup(60%),P＜0.01.Telomeraseactivitydecreasedintimedependentmanner.Conclusions:CombiningLifeinandcisplatinwasveryeffectivetomalignantascitespartlybydecreasingtelomeraseactivity.DetectionoftelomeraseactivityaftertreatmentwithLifeinandcisplatincouldbeusedasasensitivemarker

【KEYWORDS】Lifein・Cisplatin・Ascites・Telomerase

惡性腹腔積液是晚期惡性腫瘤患者的常見(jiàn)并發(fā)癥之一，嚴(yán)重影響病人的生存質(zhì)量，縮短生存時(shí)間，有效的控制惡性腹腔積液是腫瘤綜合治療中的重要組成部分。近年來(lái)，生物治療及生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用為惡性腹腔積液的治療提供了新的方法。晚近研究表明，端粒酶在惡性腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)［1~3］，而且是鑒別良惡性腹腔積液的重要生物學(xué)標(biāo)志物［4］。本研究采用力爾凡聯(lián)合順鉑腹腔內(nèi)注射治療惡性腹腔積液，探討其臨床療效及對(duì)端粒酶活性的影響。

1材料與方法

1.1臨床資料2005年3月~2006年2月48例惡性腫瘤病人，其中胃癌18例，結(jié)腸癌10例，肝癌12例，惡性腹膜間皮瘤2例，胰腺癌6例，每例均經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)證實(shí)，且超聲顯示中等到大量腹腔積液。全部患者治療前血常規(guī)，心、肝、腎功能均正常，KSP評(píng)分＞50分。上述病例隨機(jī)分為治療組（腔內(nèi)注射順鉑加力爾凡）28例，對(duì)照組（單純順鉑）20例。兩組病人在性別、年齡、臨床分期及病種無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2主要試劑和藥物半定量TRAP試劑盒：含細(xì)胞裂解液、反應(yīng)液（含正向引物）、Tag酶、逆向引物、溴酚藍(lán)二甲苯青雙色上樣緩沖液等。-80℃保存，使用時(shí)按說(shuō)明書操作并作局部改進(jìn)。力爾凡為長(zhǎng)春力爾凡藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，順鉑為濟(jì)南齊魯制藥廠產(chǎn)品。

1.3治療方法治療組：治療前行腹腔穿刺術(shù)，抽取腹腔積液1500~2000ml，然后將力爾凡20~30mg，順鉑40~60mg，地塞米松15mg，利多卡因5ml加生理鹽水40~80ml溶解，注入腹腔。注藥后囑患者變換體位，以使藥物與腹膜充分接觸。用藥當(dāng)日靜脈補(bǔ)液1500~2000ml以減輕順鉑之腎毒性，每周重復(fù)1次，3~4次為1個(gè)療程，對(duì)照組：除不用力爾凡外，其他與治療組相同。

1.4臨床療效觀察根據(jù)WHO對(duì)腫瘤藥物治療評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定。完全緩解（CR）：腹腔積液完全吸收持續(xù)1個(gè)月以上。部分緩解（PR）：腹腔積液吸收超過(guò)50%，持續(xù)1個(gè)月以上。穩(wěn)定（SD）：腹腔積液吸收不足50%，持續(xù)1個(gè)月以上。惡化（PD）：腹腔積液無(wú)變化或增加。有效率以CR+PR計(jì)算。

1.5端粒酶活性檢測(cè)分別于治療前，治療后1周，2周，3周，常規(guī)腹腔穿刺抽取腹水50ml，3000r/min離心10min，棄上清，以1%曲拉通破壞紅細(xì)胞，冷PBS洗滌2次；立即加裂解液10μl，冰浴30min，4℃15000r/min離心10min，吸取上清保存于-80℃。以TRAP銀染法檢測(cè)端粒酶活性。

每組實(shí)驗(yàn)均同時(shí)設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照（陽(yáng)性對(duì)照為SGC7901人胃癌細(xì)胞株，陰性對(duì)照為上清液65℃10min以滅活RNA酶）。所用正向引物（TS）序列為5’AATCCGTCGAGCAGAGTT3’，逆向引物（CX）序列為5’CCCTTACCCTTACCCTTACCCTTA3’。

1.6端粒酶活性的半定量分析端粒酶活性的強(qiáng)度表現(xiàn)為間隔6bp梯度帶數(shù)目及灰度強(qiáng)弱的不同，電泳結(jié)果經(jīng)SmartView生物電泳圖像分析系統(tǒng)掃描并貯存圖像，以對(duì)照組的端粒酶活性作為100，同時(shí)計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組的相對(duì)端粒酶活性。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟計(jì)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析。

2結(jié)果

2.1療效比較治療組與對(duì)照組在治療后腹水均有不同程度的減少，兩組治療結(jié)果比較見(jiàn)表1。治療組有效率89.3%，明顯高于對(duì)照組的60.0%（P＜0.01）。表1治療組與對(duì)照組療效比較組別例數(shù)CRPRSDPDCR+PR（%）治療組288173089.3*對(duì)照組20486260.0*P＜0.01VS對(duì)照組

2.2力爾凡聯(lián)合順鉑對(duì)腹水惡性腫瘤細(xì)胞端粒酶活性的影響分別檢測(cè)不同治療時(shí)間的端粒酶活性，治療組在治療后1周，平均端粒酶活性下降約50%，與陽(yáng)性對(duì)照相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；至第2周時(shí)端粒酶活性繼續(xù)下降，治療3周后端粒酶活性消失，與陰性對(duì)照相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對(duì)照組在治療后不同時(shí)間端粒酶活性也有不同程度的下降，說(shuō)明順鉑對(duì)端粒酶活性的抑制作用較順鉑聯(lián)合力爾凡為弱，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖1）。

3討論

惡性腹腔積液是晚期惡性腫瘤的常見(jiàn)并發(fā)癥，適當(dāng)治療可明顯延長(zhǎng)生存期，緩解癥狀。目前聯(lián)合化療方案有多種，總體療效并不理想［5］。近年來(lái)生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑應(yīng)用研究較多，特別是與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用治療惡性腹腔積液，取得較好療效。力爾凡是一種鏈球菌制劑，是用現(xiàn)代生物技術(shù)從溶血性鏈球菌中提取純化而得到的一組分子量為70kD的α甘露聚糖肽類物質(zhì)，研究發(fā)現(xiàn)，它可使癌細(xì)胞染色體斷裂，使癌細(xì)胞p53基因激活上調(diào)，提高癌細(xì)胞DNA甲基化酶活性，抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄，抑制癌細(xì)胞DNA聚合酶活性而直接殺傷癌細(xì)胞；其次可通過(guò)宿主介導(dǎo)的間接作用，主要是活化中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞，使腫瘤細(xì)胞黏附，并誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子的表達(dá)，起到抑制和殺瘤的作用［6］。文獻(xiàn)報(bào)道其治療惡性滲出明顯緩解率達(dá)60%，而單用順鉑總有效率40%~60%。如將兩種藥物聯(lián)合，力爾凡除本身的抑癌作用外，還起到增敏作用，使化療效果倍增。本治療組有效率達(dá)89.3%，明顯高于單用順鉑組（P＜0.01）。端粒酶作為目前具有特異性和敏感性的惡性腫瘤標(biāo)志物，不但用于惡性腫瘤的早期診斷，腫瘤的預(yù)后判斷，而且用于治療效果的評(píng)價(jià)［7~9］。Liu等進(jìn)行了良惡性腹水端粒酶活性的檢測(cè)，結(jié)果表明，檢測(cè)腹腔積液脫落細(xì)胞端粒酶活性對(duì)腹腔積液定性診斷具有重要意義，可作為良惡性腹腔積液的鑒別診斷指標(biāo)［7］。本研究將力爾凡聯(lián)合順鉑治療晚期惡性腫瘤腹腔積液，不但明顯緩解臨床癥狀，而且隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，腹水端粒酶活性逐漸降低，提示力爾凡與順鉑治療惡性腹腔積液有協(xié)同作用，其對(duì)端粒酶活性的抑制作用可能參與了以上機(jī)制，推測(cè)與腫瘤細(xì)胞染色體斷裂有關(guān)。因此檢測(cè)端粒酶活性可作為評(píng)價(jià)其療效的敏感生物學(xué)指標(biāo)。

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