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【摘要】目的建立雞血藤的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法測定了原兒茶酸的含量，C18色譜柱（250mm×4.6mm,5μm），流動相為甲醇-水-冰醋酸（25:75:0.2），流速1.0ml/min，檢測波長260nm。結果原兒茶酸與樣品中其他組分分離效果較好，原兒茶酸在31.1～93.3μg范圍具有良好線性關系，相關系數r=0.9996；平均回收率為99.49%,RSD為1.58%（n=6）。結論采用此法測定雞血藤中原兒茶酸的含量，準確可靠，可用于該藥材的質量控制。
【關鍵詞】雞血藤原兒茶酸高效液相色譜法
【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodofdetemtemineforSpatholobussuberectusDunn.MethodshplcmethodwasdevelopedforthedeterminationofprotocatechuicacidinSpatholobussuberectusDunn.TheseparationwasperformedonC18columnwithmethylalcohol-water-HAC（25:75：0.2）asamobilephasewheretheflowratewas1.0mL/min.Thedetectionwavelengthwassetat260nm.ResultsAsatisfactoryseparationbetweenprotocatechuicacidandimpuritywasobtained.Thecalibrationcurvewaslinearovertherangefrom31.1～93.3μg，r=0.9996；Theaveragerecoverywas99.49%,andRSD為1.58%（n=6）.ConclusionThemethodwasaccurateandcanbeusedforthedetemrminationofconstituentsforSpatholobussuberectusDunn.
【Keywords】spatholobussuberectusdunn;protocatechuicacid;HPLC
雞血藤為豆科植物雞血藤SpatholobussuberectusDunn的干燥藤莖，別名血風藤、大血藤、血風、活血藤。雞血藤為常用活血化瘀中藥，具有補血、活血、通絡作用【1】。《中國藥典》收載了1個種，主要分布在廣西、云南、貴州等地，雞血藤可極顯著的使環磷酰胺致貧血小鼠的紅細胞值、血紅蛋白值和白細胞值上升【2】，能擴張外周血管,增加器官血流量,實驗證實對犬股動脈有明顯擴張作用【3】，對免疫系統具有雙向調節作用【3】,能降低血脂、抗動脈樣硬化作用【4】。雞血藤中含有多種化學成分，但《中國藥典》中并無含量測定方法，為此，筆者采用HPLC法測定了雞血藤藥材中原兒茶酸的含量，方法簡便、靈敏、準確，對雞血藤藥材的質量鑒定有一定的參考價值。
1儀器與試藥
高效液相色譜儀：島津LC-10A液相色譜儀，
SPD-10A紫外檢測器，南寧威瑪龍色譜工作站，HT-230A柱溫箱。色譜柱為Diamonsil（TM）鉆石C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；LIBRORAEL-160型萬分之一電子分析天平；DS-250A（功率）型超聲清洗儀。原兒茶酸對照品（批號：809－200102）購自中國藥品生物制品檢定所；雞血藤藥材產自廣西、云南、貴州，由貴州大學生物與科學學院生物系關平教授鑒定為SpatholobussuberectusDunn的干燥根莖。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。
2方法與結果
2.1色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸（25:75:0.2）為流動相；檢測波長為260nm。理論塔板數按原兒茶酸峰計算應不低于3000。對照品與樣品色譜圖見圖1。
2.2對照品溶液的制備精密稱取原兒茶酸對照品適量，加酸性水（100ml水中加1mol/L的HCL0.5ml）制成每1ml含3μg的溶液，即得。
2.3供試品溶液制備取本品細粉1g，精密稱定，加水回流2次，每次20ml，濾過，合并濾液并濃縮至約2ml，加入甲醇10ml，濾過，濾液揮干，再加入乙酸乙酯20ml和1mol/L的鹽酸0.5ml，超聲30min，濾過，濾液揮干，殘渣加20ml酸性水（100ml水中加1mol/L的HCL0.5ml）超聲5min使溶解，濾過，濾液過微孔濾膜，作為藥材供試品。
測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各l0μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件，以外標法計算含量。見圖1、圖2。
2．4線性關系考察精密量取原兒茶酸對照溶液配制成1、2、3、4、5μg/ml，分別取10μl注入高效液相色譜儀，進行原兒茶酸含量測定，以原兒茶酸峰面積A對原兒茶酸濃度C進行線性回歸，線性回歸方程：A=46033C－289.75，線性范圍：0.01～0.05μg，相關系數r=0.9996。根據實驗結果，原兒茶酸在0.01～0.05μg范圍內，峰面積與進樣量呈良好的線性關系。
2.5精密度考察取同一對照品，分別重復進樣6次，測定結果，對照品溶液中原兒茶酸RSD=0.50%（n=6）。
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sp;2.6重復性試驗取本品6份，精密稱定樣品，按【樣品含量測定】項下的方法操作，制成供試品溶液，測定原兒茶酸的平均含量為57.48μg/g，RSD為1.76%。2.7穩定性試驗將供試品溶液在室溫下貯存，于0、2、4、6、8h測定，結果樣品溶液在8h內穩定，RSD為1.77%。
圖1原兒茶酸對照品HPLC色譜圖圖2樣品HPLC色譜圖2.8加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品共6份，分別加入等量原兒茶酸對照品，照供試品方法制備，測定含量，原兒茶酸平均回收率為98.32%,RSD=1.64%（n=6），結果見表1。表1原兒茶酸回收率實驗結果
2.9不同產地雞血藤中原兒茶酸的含量測定按2.3項下方法,制備供試品溶液,測定3個產地雞血藤藥材中原兒茶酸的含量,測定結果見表2。
3討論
3．1原兒茶酸屬有機酸，極性較大，選擇反相色譜法，流動相選擇甲醇：水（15：85）的體系，出峰時間較長，且峰形較寬；選用甲醇：水（25：75）的體系，出峰時間適中，峰形仍較寬；故選用甲醇：水：冰乙酸（25：75：0.2）的體系，出峰時間約為9min，峰形尖銳，理論板數達到3000以上，達到分離要求。表2不同產地雞血藤中原兒茶酸的
3．2雞血藤粉末采用不同提取方法包括50%、80%甲醇索氏提取4h，50％、80％甲醇回流提取2h，醋酸乙酯超聲30min，醋酸乙酯加水（1：1）超聲30min，水提取醇沉后乙酸乙酯萃取；發現水提取醇沉后乙酸乙酯萃取的方法，含量較高且分離度也好，但是萃取過程中的重復性差，考慮到有機酸在酸性水中用乙酸乙酯萃取效果較好，試用少量酸性水加乙酸乙酯直接超聲的方法，獲得了含量較高且分離度也好的結果，最后的定量溶液用酸水不用甲醇也是為了達到較好分離效果而定的。
3．3由于市售的雞血藤藥材混用品較多，因此制訂雞血藤藥材的質量標準是非常必要的，從高效液相結果可以看出，用原兒茶酸檢測雞血藤藥材質量是可行的。筆者認為，如果在定性檢測芒柄花素的同時，能加上原兒茶酸的含量測定，就能更好的控制雞血藤藥材的質量。
【參考文獻】
1國家藥典委員會.中國藥典（一部）.北京：化學工業出版社，2005，134.
2羅霞，陳東輝，余夢姚,等.雞血藤煎劑對小鼠紅細胞增值的影響.中國中藥雜志，2005,30（6）:477-479.
3崔艷君,陳若蕓.雞血藤化學和藥理研究進展.天然產物研究與開發,2002，15（4）：72-78.
4王巍.雞血藤、鬼箭羽和土鱉蟲調脂作用的比較.中國中藥雜志，1991，16（5）：299-301.新晨