乳腺腫瘤細胞中彈力纖維的表達差異范文

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摘要：目的研究乳腺良、惡性腫瘤細胞外基質中彈力纖維含量，分析良惡性乳腺腫瘤細胞外基質中彈力纖維的表達差異。方法對解放軍總醫院第一醫學中心2014年5月-2015年8月49例良、惡性乳腺腫瘤標本以醛品紅法染色，采用顯微圖像分析系統(LeciaQ500MC；Cambridge，UK)定量分析切片細胞外基質中彈力纖維面積，比較其在良惡性腫瘤中含量差異。結果惡性組26例，年齡35~71(46.5±7.7)歲，良性組23例，年齡31~72(38.3±11.9)歲。惡性組主要為浸潤性導管癌(n=18)，良性組主要為纖維腺瘤(n=12)。良性腫瘤細胞外基質中彈力纖維面積為(9257.5±2392.8)μm2，惡性組為(14384.4±2853.7)μm2，惡性組腫瘤細胞外基質中彈力纖維含量較良性組腫瘤升高(P＜0.05)。結論良、惡性乳腺腫瘤細胞外基質中彈力纖維含量存在較大差異，惡性病例中彈力纖維含量升高。

關鍵詞：乳腺腫瘤；彈力纖維；細胞外基質；病理學

細胞外基質(ECM)結構和生物力學性能的變化是影響乳腺病變發展的重要因素，其成分變化從結構支持到調節信號通路等多方面影響乳腺腫瘤的進展[1-3]。在細胞外基質中，彈力纖維分子間通過賴氨酸殘基參與的交聯形成富于彈性的網狀結構，可激活多類信號通路，導致細胞增殖和侵襲能力增加[4-5]。本課題組前期研究表明，細胞外基質中膠原纖維的變化與剪切波彈性模量值呈正相關。隨著彈力纖維在腫瘤進展中的作用研究逐漸深入，本文對乳腺腫瘤細胞外基質中的彈力纖維做定量研究，以提高細胞外基質成分在腫瘤生物學進程中作用的認識。

資料和方法

1資料來源

收集2014年5月-2015年8月在解放軍總醫院第一醫學中心行超聲引導下活檢確診為乳腺癌和乳腺良性腫瘤的患者49例。納入標準：女性患者在本院行穿刺病理檢查有明確診斷；排除標準：患者診斷前有其他器官腫瘤病史。

2穿刺活檢方法

采用Philips公司IU22超聲診斷儀，探頭頻率為12~5MHz，觀察并記錄病灶常規超聲特征，對病灶行超聲引導下穿刺活檢，留取足量腫瘤組織待查。依據病理結果將入組患者分為良性組與惡性組。

3彈力纖維染色與定量切片

脫蠟后使用酸化高錳酸鉀氧化5min，流水沖洗；用2%草酸漂白1min后流水沖洗；入醛品紅液染色6min左右，使用75%酒精洗滌至切片不再脫色為止，橙黃G滴染1s后水洗，脫水、透明、封片后置于光學顯微鏡下觀察[6]。隨機選取5張高倍鏡視野，采用顯微圖像分析系統(LeciaQ500MC；Cambridge，UK)定量分析切片內彈性纖維所占面積，求取彈性纖維面積算術平均數[7]。4統計學方法采用SPSS17.0軟件進行統計學分析，計量資料比較選用獨立樣本t檢驗，計數資料對比選用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

1兩組基線特征比較

良性組23例，年齡31~72(38.3±11.9)歲；惡性組26例，年齡35~71(46.5±7.7)歲。惡性組平均年齡較大；兩組患者病灶均以低回聲為主，良性組中等回聲病灶較多(n=5)，而惡性組中極低回聲病灶較多(n=7)；良性組中纖維腺瘤最多(n=12)，而惡性組中浸潤性導管癌占絕大多數(n=18，69.2%)。見表1

2兩組細胞外基質中彈力纖維含量比較

26例惡性病灶細胞外基質中彈力纖維面積達6776.3~20069.9(14384.4±2853.7)μm2，23例良性病灶細胞外基質中彈力纖維面積達4760.0~13950.7(9257.5±2392.8)μm2，惡性組面積顯著高于良性組(P＜0.05)。

3典型病例

52歲女性，左乳外上象限極低回聲結節(BI-RADS5類)，結節形態不規則，邊界不清，周邊有厚聲暈，呈毛刺樣，患者行超聲引導下穿刺活檢，樣本采用醛品紅法染色，采用顯微圖像分析系統定量計算基質中彈力纖維表達面積為17939.4μm2；32歲女性，左乳內上象限低回聲結節(BI-RADS3類)，結節邊界清楚，形態規則，基質中彈力纖維表達面積為7282.5μm2(見圖1~圖2)。

討論

近年來，多個研究發現腫瘤細胞外基質成分對腫瘤發生、發展、侵襲、轉移起到極為重要的調控作用，細胞外基質各成分的分泌、沉積和調控機制等研究備受關注[8-9]。既往本課題組研究認為，腫瘤發生過程中伴隨著膠原交聯，多種蛋白表達增多，腫瘤的硬度不斷增加，而細胞外基質成分的含量變化與腫瘤硬度有直接關系[10]。某些腫瘤成瘤過程中出現纖維組織增生，尤其是在乳腺癌中更為明顯，膠原蛋白和彈力纖維在其中發揮重要作用。乳腺癌進展過程中，TGF-β可通過調高轉錄活性調控彈力纖維在基質中的分泌，促進上皮間質轉換，增加乳腺癌轉移風險[11-12]。既往有實驗發現成瘤過程中彈力纖維的含量增加了70%，而其中絕大部分是由基質外細胞產生[13]。這些沉積在基質外的彈力纖維與膠原蛋白等通過賴氨酰氧化酶(LOX)催化、交聯，改變了組織彈性和基質結構，作用于腫瘤進展、轉移的各個過程[11]。本實驗乳腺癌組中彈力纖維沉積明顯增高，而絕大部分沉積于基質中，與之前的研究結果相似[14-15]，而通過顯微圖像分析系統定量對比人類良、惡性乳腺腫瘤細胞外基質中的彈力纖維沉積，尚屬首次。乳腺惡性腫瘤的剪切波彈性模量值要遠高于良性腫瘤[16]。有學者認為細胞外基質中的彈力纖維含量變化是影響腫瘤硬度的主要原因。因此推測本實驗中彈力纖維的增高可能是影響惡性腫瘤硬度增加的機制之一。同時我們注意到，本研究中數例良性病灶的彈力纖維面積超過個別惡性病例，其中2例硬化性腺病病灶的彈力纖維面積均超過惡性組平均分布面積，2例纖維腺瘤病灶的彈力纖維面積高于惡性組平均分布面積，結合超聲影像學數據上述幾例病灶直徑均較大，形態尚規則，病灶周圍腺體較豐富。有研究顯示病灶病理分型和病灶大小均與乳腺病灶硬度具有相關性[5]，可能的原因是病灶體積增大，其基質中彈力纖維等分布增高，而luminalB型乳腺癌硬度較luminalA型普遍增高[17]；同時原位癌硬度相對較小[18]，可能是由于基質彈力纖維沉積較少所致。由此可見，部分良性病灶基質中彈力纖維分布面積可能高于惡性病灶，由于本研究中各病理分型樣本量偏少，需要更深入的探索研究。本研究是針對乳腺腫瘤細胞外基質中彈力纖維的基礎性研究，入組病例年齡在兩組間存在差異，因此，兩組間比較可能存在一定的偏倚。本研究中定量比較了乳腺腫瘤細胞外基質中的彈力纖維含量變化，為深入研究細胞外基質中彈力纖維對于腫瘤生物學行為的調控機制打下了較好的基礎。

作者：李亞帥 王知力 何艷 單位：解放軍總醫院第一醫學中心