可樂定及賽庚啶檢測技術研究范文

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在飼糧中添加可樂定（Clonidine），可降低脂肪比率，提高瘦肉率，改善肉類品質，并能促進動物生長發育。賽庚啶（Cyproheptadine）能夠刺激食欲，增加體重。基于可樂定和賽庚啶的這些特性，一些養殖企業將其作為非法飼料添加劑用于促進畜禽生長。2010年我國的《禁止在飼料和動物飲水中使用的物質》將可樂定和賽庚啶列入其中。

1可樂定與賽庚啶的理化特性

樂定（Clonidine）分子式C9H9C12N3，分子量230，屬于咪唑啉衍生物，具有激發與促進垂體增加分泌生長激素(GH)的作用，因此可促進動物生長，改善畜產品品質。其缺點是副作用大、易積累，消費者一旦食用含有可樂定殘留的動物源性食品，將會危及自身健康。賽庚啶（Cyproheptadine）分子式為C21H21N，分子量為287。賽庚啶與動物下丘腦食欲中樞的5-羥色胺起到拮抗作用，從而抑制刺激動物食欲，使其體重增加，在動物飼料中的違法使用，與“瘦肉精”鹽酸克侖特羅的效果類似，被稱為新型“瘦肉精”。

2可樂定和賽庚啶的檢測方法

2.1可樂定測定方法

無論是飼料樣品還是動物組織、血液、尿液等，均可使用液相色譜-串聯質譜法測定可樂定的含量，該檢測方法的優點為靈敏度較高、選擇性好、檢出和定量限低、準確度高。相色譜-串聯質譜法測定的缺點為前處理繁瑣、試驗耗時長、儀器價格昂貴、檢測成本高等，不適用于普通養殖廠及現場快篩。因此，根據免疫競爭原理，采用抗原抗體特異性反應，建立了適合基層推廣普及，同時也適合快篩的酶聯免疫檢測試劑盒，避免了上述液相色譜-串聯質譜法測定的缺點。

2.2賽庚啶測定方法

已有的賽庚啶殘留量的測定方法主要是利用超高效液相色譜-串聯質譜法，待測樣品主要是飼料、豬肉和豬毛。該方法準確度和靈敏度較高，具有較強的可行性和實用性。尤其是采用豬毛作為樣品，具有易采集，能夠實時監控等優點，彌補了常規豬肉、豬血等檢測技術的不足，是完善賽庚啶檢測技術的一大進步。

3同時檢測可樂定和賽庚啶的方法

目前，已有的可樂定及賽庚啶含量檢測方法主要涉及的待測樣品有飼料、飲水、動物尿液、動物血液、畜產品及動物組織等。

3.1飼料中可樂定及賽庚啶的測定

3.1.1高效液相色譜法吳建平等建立了適用于同時檢測飼料（包括預混飼料、濃縮飼料和配合飼料）中可樂定及賽庚啶違法添加的高效液相色譜法，該方法具有較高的精密度、準確度和特異性，并可初步定性。[1]

3.1.2超高效液相色譜-串聯質譜法李丹妮等利用超高效液相色譜-串聯質譜來檢測飼料中鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶的非法添加量。樣品經酸性甲醇提取，濃縮后用乙腈-0.2%甲酸溶解，經超高效液相色譜-串聯質譜在多反應檢測(MRM)模式下測定。結果顯示鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶在0.02～1.0mg/kg添加水平下，加標回收率為70%～110%，相對標準偏差(RSD)均小于10%(n=6)；該方法對動物飼料中鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶的定量限為0.02mg/kg(S/N＞10)，檢出限為0.01mg/kg(S/N＞3)。

3.1.3國家標準農業部1486號公告-2-2010規定了采用液相色譜-串聯質譜的方法測定飼料中可樂定和賽庚啶，將飼料試樣經鹽酸甲醇混合溶液提取后，用混合型陽離子交換柱凈化，洗脫液蒸干后用含0.2%甲酸的乙腈水溶液溶解，采用液相色譜-串聯質譜儀進行檢測。該標準的檢測限為0.01mg/kg，定量限為0.02mg/kg。

3.2畜產品中可樂定及賽庚啶的殘留測定

3.2.1豬肉中可樂定及賽庚啶的殘留測定將豬肉樣品用0.1mol/LHCl酸化的甲醇(VCH3OH/VHCl=80:20)提取，WCX固相萃取小柱凈化，利用超高效液相色譜-串聯質譜來測定含量。豬肉樣品中鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶的檢出限均為為0.2μg/L，定量限均為0.6μg/L，批內和批間的精密度均小于10%，回收率均在85%～100%。該方法的優點為操作簡單、檢出限和定量限低、試驗時間短、內標回收率高，提供了一種豬肉中可樂定和賽庚啶殘留量的檢測方法。

3.2.2豬可食組織（豬肉、豬肝和豬腎）中可樂定及賽庚啶的殘留測定應用QuEChERS技術進行前處理，利用超高效液相色譜-串聯質譜確定豬可食組織中可樂定和賽庚啶的殘留量，該方法能較好的凈化基質，試驗操作步驟簡便，檢測效率得到了大大的提升。對豬可食組織中可樂定和賽庚啶在添加濃度范圍為1～50μg/kg內的回收率均在62%～121%之間，相對偏差小于10%，檢出限為0.5μg/kg。[2]

3.3其他部位中可樂定及賽庚啶的殘留測定

可樂定和賽庚啶等藥物進入到動物體內之后，會存在于動物的毛發、血液、尿液中，因此可將方便易取的動物毛發、血液、尿液等作為可樂定和賽庚啶的待檢樣品，從而及時排查食品安全隱患，保障食品安全，并可以用于生豬屠宰前的快速監控。

3.3.1豬毛中可樂定及賽庚啶的殘留測定檢測毛發中的藥物濃度可間接反映藥物在動物組織中的積累，且毛發易獲得，能夠作為測定可樂定及賽庚啶藥物殘留濃度的可靠待檢樣本。其中前處理的方法是利用0.1mol/L氫氧化鈉溶液溶解樣品，乙腈提取，液質聯用測定。該方法的優點是試驗操作簡便且快捷，檢出限和定量限低，內標回收率高。[3]

3.3.2豬尿液中可樂定及賽庚啶的殘留測定陳其煌建立了檢測尿液中可樂定和賽庚啶殘留量的高效液相色譜—串聯質譜法，待測樣品用高氯酸溶液酸解及沉淀蛋白質，用乙酸乙酯—異丙醇提取，經凈化、富集后，利用UPLC-MS/MS進行定性和定量分析。鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶在1.0～1000μg/L的范圍內線性關系良好（r≥0.9995），在0.2、2.0、10.0μg/L添加水平下的回收率為83.5%～95.1%，定量限（以信噪比＞10計）為0.2μg/L。該方法的優點為樣品前處理步驟簡單，有機溶劑使用量少，檢出限和定量限低，精密度和準確度高，可實現宰前檢測，及時排除食品安全隱患，保障食品質量安全。[4]

3.3.3豬血液中可樂定及賽庚啶的殘留測定測定活體動物的血液可有效解決獸藥殘留檢測的時滯性問題。楊挺等采用了高效液相色譜-串聯質譜法測定豬血中的可樂定和賽庚啶的殘留量，二者的檢出限和定量限均分別為0.2μg/L和0.6μg/L，批內和批間的精密度均小于10%，回收率均在85%～110%之間。該方法簡便、快捷、檢出限低、回收率高。[5]

4小結

隨著人們生活水平的提高，人們對食品安全問題越來越重視，其中獸藥的違規使用和非法添加嚴重威脅食品安全和消費者健康。可樂定和賽庚啶的違法使用造成了新的食品安全問題，這就要求相應的監測機構必須要選擇合適的樣品種類及檢測方法，及時、準確、快速的檢測出可樂定和賽庚啶的非法添加，以保障食品安全。

參考文獻：

[1]吳劍平,張鑫,顧欣,等.高效液相色譜法測定飼料中鹽酸賽庚啶和鹽酸可樂定含量[J].中國飼料,2014,(13):33-36.

[2]李丹妮,嚴鳳,周悅榕,等.QuEChERS-超高效液相色譜法-串聯質譜法同時檢測豬組織中賽庚啶及可樂定殘留量[J].中國獸藥雜志,2017,(2):29-34.

[3]許秀琴,楊挺,趙健,等.高效液相色譜-串聯質譜法測定豬毛中鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶[J].中國獸藥雜志,2015,(7):47-51.

[4]陳其煌.高效液相色譜-串聯質譜法測定豬尿液中鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶[J].福建農業學報,2012,(6):596-600.

[5]楊挺,許秀琴,趙健,等.高效液相色譜-串聯質譜法測定豬血中鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶[J].肉類研究,2015,(6):25-28.

作者：張瑩雪 單位：鄭州市獸藥飼料監察所