細(xì)胞通透性銅離子熒光探針研究范文

本站小編為你精心準(zhǔn)備了細(xì)胞通透性銅離子熒光探針研究參考范文，愿這些范文能點(diǎn)燃您思維的火花，激發(fā)您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

《Chemical Journal of Chinese Universities》2016年第11期

摘要：

分別以羅丹明B和羅丹明6G為熒光信號報(bào)告基團(tuán)，以增強(qiáng)水溶性為目的的羥乙基肼為修飾基團(tuán)，合成了反應(yīng)型的Cu2+離子選擇性熒光探針分子L1和L2．紫外光譜和熒光光譜等分析結(jié)果表明，探針分子L1和L2對Cu2+離子具有高靈敏度、高選擇性的光譜識別行為．探針分子對Cu2+離子的識別過程是通過Cu2+離子催化水解控制氧雜蒽熒光信號的螺環(huán)酰肼基團(tuán)實(shí)現(xiàn)熒光信號的開啟，從而達(dá)到識別檢測Cu2+離子的目的，對Cu2+離子的檢出限均可達(dá)到10－8mol/L量級．同時(shí)，探針分子對常見金屬離子和銨離子均具有較強(qiáng)的抗干擾能力．由于羥乙基肼的引入增強(qiáng)了探針的水溶性，使得探針L1和L2具有良好的細(xì)胞通透性和低毒性，實(shí)現(xiàn)了其對β-胰島細(xì)胞(INS-1細(xì)胞)中Cu2+離子的熒光成像檢測．

關(guān)鍵詞：

羅丹明;酰肼;二價(jià)銅離子;熒光探針;熒光成像銅

在生物體和自然界中都是不可或缺的重要過渡金屬元素．在生物體內(nèi)，Cu2+離子作為金屬酶和轉(zhuǎn)錄過程中重要的輔助因子參與了很多重要的生理過程［1］;在自然界中，銅是人類最早使用的金屬之一，環(huán)境中常常可以檢測出Cu2+離子的存在．然而，過量存在的Cu2+離子對生物體和環(huán)境均有不利影響［2，3］．諸多神經(jīng)退行性疾病，如阿爾茲海默病［4］、帕金森病［5］及威爾森病［6］等都與人體中存在過量的Cu2+離子所導(dǎo)致的氧化應(yīng)激和神經(jīng)紊亂有關(guān);而Cu2+離子對環(huán)境中水的污染也很嚴(yán)重，飲用水中如含有過量的Cu2+離子會(huì)引起人胃腸功能紊亂和肝腎功能損傷［7］;同時(shí)，在自然環(huán)境中存在的高濃度Cu2+離子會(huì)損害海洋、河流的自凈能力［8］．因此，監(jiān)控生物體內(nèi)和環(huán)境載體中Cu2+離子的濃度十分必要．熒光檢測方法具有響應(yīng)快速、靈敏度高和探針易制備［9，10］等優(yōu)點(diǎn)，基于熒光檢測方法的Cu2+離子探針的研究近年來備受關(guān)注．已報(bào)道的Cu2+離子熒光探針主要基于2種化學(xué)作用機(jī)制:Cu2+離子與探針配位形成配合物［11～14］，或Cu2+離子引發(fā)探針發(fā)生一些特殊的化學(xué)反應(yīng)［15～17］．由于Cu2+離子自身的順磁性特點(diǎn)［18，19］，通過探針分子與Cu2+離子配位進(jìn)行Cu2+離子檢測的方法往往會(huì)引起探針的熒光信號猝滅［20～22］，從檢測靈敏度角度考慮，猝滅型的熒光檢測并不是分析檢測的最佳方式．同時(shí)，由Irving-Williams序列規(guī)則可知，通過配位作用識別Cu2+離子的熒光探針容易被其它等電荷過渡金屬離子如Mn2+，F(xiàn)e2+，Co2+和Ni2+等離子干擾．因此，設(shè)計(jì)由Cu2+離子引發(fā)探針發(fā)生特定的化學(xué)反應(yīng)而引起紫外或熒光光譜信號發(fā)生變化的Cu2+離子熒光探針已成為近年來的研究熱點(diǎn)．這類由Cu2+離子引發(fā)化學(xué)反應(yīng)的熒光探針往往會(huì)表現(xiàn)出熒光增強(qiáng)的效果［23～26］，有助于消除其它過渡金屬離子造成的干擾．其中，具有內(nèi)酰肼螺環(huán)結(jié)構(gòu)的羅丹明類染料［27～29］就是一類典型的反應(yīng)型熒光探針．在氧雜蒽的π共軛體系中引入一個(gè)特殊的化學(xué)鍵形成內(nèi)酰肼，使熒光信號報(bào)告基團(tuán)的π共軛體系處于不發(fā)光的非共軛狀態(tài);當(dāng)探針分子與Cu2+離子發(fā)生作用時(shí)，Cu2+離子可引發(fā)反應(yīng)斷開該化學(xué)鍵，開啟共軛體系，恢復(fù)羅丹明熒光團(tuán)的發(fā)光性能，從而達(dá)到檢測Cu2+離子的目的．本文基于Cu2+離子可促進(jìn)α-氨基酸酯水解和Cu2+離子可對羅丹明螺環(huán)內(nèi)酰胺水解的機(jī)制［27，30，31］，分別以羅丹明B和羅丹明6G為熒光信號報(bào)告基團(tuán)，設(shè)計(jì)合成了以羥乙基肼增強(qiáng)水溶性的Cu2+離子選擇性反應(yīng)型螺環(huán)酰肼熒光探針分子L1和L2．實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，引入2-羥乙基官能團(tuán)不但增強(qiáng)了探針的水溶性并保持了其肼類衍生物的識別性能，還表現(xiàn)出良好的細(xì)胞穿透能力及低毒性等性能，可實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞中Cu2+離子的熒光成像檢測．

1實(shí)驗(yàn)部分

1．1試劑與儀器

羅丹明B和羅丹明6G購自上海晶純試劑有限公司;丙酮酸鈉購自天津科密歐化學(xué)試劑有限公司;2-羥乙基肼購自韶遠(yuǎn)科技有限公司;濃硫酸、碳酸氫鈉、氯化鈉、二氯甲烷、甲醇、乙腈、乙醇、N，N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、β-巰基乙醇、磷酸氫鈉(PBS)緩沖液、二甲基亞砜和硅膠(100～200目)均購自天津恒山化工科技有限公司;光譜分析所用水為二次蒸餾水，無熒光雜質(zhì)．RY-2型熔點(diǎn)儀(天津市分析儀器廠);BrukerAVANCEⅢ型核磁共振波譜儀(1HNMR，400MHz，TMS為內(nèi)標(biāo)，CDCl3為溶劑);UV-2550型紫外-可見(UV-Vis)分光光度計(jì)(日本Shimadzu公司);F-4600型熒光光譜儀(日本Hitachi公司);ZAB-HS型質(zhì)譜儀(英國VG公司);FV-1000型激光共聚焦顯微鏡(日本Olympus公司)．

1．2探針分子的合成

探針分子L1和L2的合成路線如Scheme1所示．探針分子L1的合成:稱取1.82g(4.1mmol)羅丹明B置于100mL圓底燒瓶中，加入15mL甲醇溶解．在攪拌下緩慢滴入4mL濃H2SO4，回流36h．將反應(yīng)混合物倒入100mL水中，用碳酸氫鈉中和至中性，用二氯甲烷萃取(100mL×3)，分離出的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(50mL×2)，收集有機(jī)相并干燥，得到1.98g粗產(chǎn)品1，粗產(chǎn)品1未經(jīng)純化直接用于下一步反應(yīng)．稱取262.8mg(0.533mmol)粗產(chǎn)品1置于25mL圓底燒瓶中，加入5mL甲醇和250μL2-羥乙基肼(2)，在氬氣氣氛中加熱回流52h．旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑后，固體混合物經(jīng)柱色譜分離［V(SiO2)∶V(CH2Cl2/CH3COOC2H5)=5∶3］，得到107mg紫色固體化合物L(fēng)1，產(chǎn)率41%，m．p．190～192℃．1HNMR(400MHz，CDCl3)(圖S1，見本文支持信息)，δ:7.92(d，J=8Hz，1H)，7.53～7.47(m，2H)，7.14(d，J=8Hz，1H)，6.45～6.40(m，4H)，6.26(d，J=12Hz，2H)，3.33(q，J=6.7Hz，10H)，2.45(s，2H)，1.16(t，J=8Hz，12H);13CNMR(100MHz，CDCl3)(圖S2，見本文支持信息)，δ:168.3，153.9，151.5，149.0，133.1，130.0，128.5，124.2，123.0，108.0，105.3，98.0，66.4，58.8，52.8，44.5，29.8，12.7;HRMS，m/z:501.2862［M+H］+．探針分子L2的合成:稱取200mg(0.452mmol)羅丹明6G置于50mL圓底燒瓶中，加入5mL無水乙醇，再加入200μL2-羥乙基肼(2)，加熱回流反應(yīng)72h，然后旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，所得粗產(chǎn)物在乙醇中重結(jié)晶，得到122.9mg粉紅色晶體L2，產(chǎn)率58%，m．p．273～275℃;1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:7.95～7.93(m，1H)，7.52～7.50(m，2H)，7.11～7.09(m，1H)，6.38(s，2H)，6.20(s，2H)，3.32(bs，2H)，3.21(q，J=8Hz，4H)，2.42(bs，2H)，1.90(s，6H)，1.32(t，J=6Hz，6H);13CNMR(100MHz，CDCl3)(圖S4，見本文支持信息)，δ:168.2，152.3，151.7，147.7，133.2，129.9，128.5，128.1，124.1，123.1，117.9，105.7，96.8，66.4，58.7，52.7，38.5，16.8，14.8;HRMS，m/z:473.2560［M+H］+．1．3溶液的配制實(shí)驗(yàn)所用分析溶液是將一定體積的探針分子濃溶液(1×10－2mol/L，DMF)與相應(yīng)體積各種金屬離子的水溶液(1×10－2mol/L)混合，再用乙腈/水混合溶劑(體積比1∶5)稀釋，將分析溶液體系定容到3mL．在室溫下，將上述分析溶液搖勻并靜置10min后測定光譜數(shù)據(jù)．1．4細(xì)胞的熒光成像實(shí)驗(yàn)選用細(xì)胞為β-胰島細(xì)胞(INS-1細(xì)胞)，培養(yǎng)基為RPMI1640培養(yǎng)基，其中加入10%血清、5×10－5mol/L的β-巰基乙醇、1×10－6mol/L丙酮酸和500μL雙抗．先將探針分子溶于DMSO中，取一定量該溶液加入到含有培養(yǎng)好的INS-1細(xì)胞的培養(yǎng)板中，最終濃度為2×10－7mol/L，再置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30min，用PBS緩沖液漂洗3次，然后用倒置熒光顯微鏡觀察;再加入Cu2+離子的水溶液，使其最終濃度為2×10－6mol/L，在培養(yǎng)箱中孵育30min，最后用激光共聚焦顯微鏡觀察．

2結(jié)果與討論

2．1紫外-可見光譜分析

采用紫外-可見光譜研究了2種探針分子與Cu2+離子的相互作用．在乙腈/水混合溶劑(體積比1∶5)中，探針分子L1和L2在400～700nm的可見光譜區(qū)間基本沒有吸收(見圖1)．當(dāng)加入5倍濃度的Cu2+離子后，紫外-可見光譜分別在553和521nm處出現(xiàn)吸光度值的顯著增強(qiáng)，且溶液顏色發(fā)生明顯變化，從無色變?yōu)殚偕?L1)或粉紅色(L2)．這種現(xiàn)象表明2種探針分子均與Cu2+離子發(fā)生了識別作用，誘導(dǎo)了探針分子的羅丹明內(nèi)酰肼螺環(huán)結(jié)構(gòu)開啟，摩爾吸光系數(shù)分別提高到εL1=7.17×104L•mol－1•cm－1和εL2=8.71×104L•mol－1•cm－1．另外，還考察了其它過渡金屬離子、堿金屬離子和堿土金屬離子與探針分子之間的相互作用．如圖1中插圖所示，在分別加入5倍濃度的Ag+，Al3+，Ca2+，Cd2+，Co2+，Cr3+，F(xiàn)e2+，F(xiàn)e3+，Hg2+，K+，Mg2+，Na+，NH+4，Ni2+，Pb2+和Zn2+離子溶液后，除了Hg2+離子可引起探針分子L1和L2有較微弱的吸收增強(qiáng)(＜10%)之外，其它離子均未引起探針分子在該波長下的明顯吸收變化;而且溶液顏色未發(fā)生明顯變化．因此，探針分子L1和L2可作為比色傳感的Cu2+離子探針使用．

2．2熒光光譜性質(zhì)

在相同的乙腈/水混合溶劑體系中，采用熒光光譜考察了探針分子L1和L2對上述不同金屬陽離子的熒光光譜識別行為．由圖2可見，探針分子L1(1×10－6mol/L)在520nm激發(fā)時(shí)，自身的熒光背景很弱，熒光發(fā)射強(qiáng)度僅為5.3a．u．，而探針分子L2在500nm激發(fā)時(shí)，其熒光強(qiáng)度為46.3a．u．．當(dāng)向2種探針溶液中加入5倍濃度的Cu2+離子后，發(fā)現(xiàn)探針分子L2的熒光開啟變化非常顯著，熒光強(qiáng)度可達(dá)到4158a．u．，而探針L1的熒光強(qiáng)度只有651a．u．．這說明探針分子L1不管在內(nèi)酰肼螺環(huán)關(guān)閉還是開啟的情況下，都比探針分子L2的相應(yīng)體系測得的熒光強(qiáng)度要低，即熒光量子產(chǎn)率低．這種現(xiàn)象可以解釋為，探針分子L1中N上的雙烷基取代使其具有更好的給電子能力，可引發(fā)L1分子內(nèi)的光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移(PET作用)［32］，導(dǎo)致熒光效率降低．但是，在比較同一探針加入Cu2+離子前后的熒光強(qiáng)度比時(shí)發(fā)現(xiàn)，探針分子L1的熒光強(qiáng)度增大倍數(shù)(122倍)是探針分子L2增大倍數(shù)(90倍)的1.4倍．這說明雖然加入Cu2+離子后，L1開啟的熒光強(qiáng)度并不高，但是由于探針分子L1自身較低的熒光背景，使其在Cu2+離子識別過程中仍具有較高的靈敏度．同時(shí)，還研究了探針分子L1和L2與其它離子(Ag+，Al3+，Ca2+，Cd2+，Co2+，Cr3+，F(xiàn)e2+，F(xiàn)e3+，Hg2+，K+，Mg2+，Na+，NH+4，Ni2+，Pb2+和Zn2+)的相互作用，可以看出除了L2對Hg2和Cr3+離子有微弱的熒光增強(qiáng)外，其它離子均未發(fā)現(xiàn)明顯的熒光變化，說明探針L1和L2對Cu2+離子都是具有高靈敏度和高選擇性的化學(xué)傳感體系．為了進(jìn)一步考察探針分子對Cu2+離子識別時(shí)熒光強(qiáng)度變化與Cu2+離子濃度之間的關(guān)系，進(jìn)行了2種探針分子與不同濃度的Cu2+離子熒光光譜連續(xù)滴定實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖3和圖S5(見本文支持信息)．在滴定過程中，隨著Cu2+離子濃度的不斷增大，探針分子與Cu2+離子反應(yīng)后的熒光光譜在580nm(L1)和550nm(L2)處逐漸增強(qiáng)．Cu2+離子濃度增量分別達(dá)到15倍(L1)和13倍(L2)時(shí)，識別體系的熒光強(qiáng)度接近飽和．而且連續(xù)滴定的熒光光譜數(shù)據(jù)很好地符合了Sigmoidal擬合曲線，從而計(jì)算出探針分子L1和L2對Cu2+離子的熒光“開啟”常數(shù)K(L1－turn-on)=2.08μmol/L(R2=0.9998)，K(L2－turn-on)=2.6μmol/L(R2=0.9991)［33］．另一方面，在低濃度Cu2+離子區(qū)域，熒光變化與Cu2+離子濃度呈現(xiàn)線性關(guān)系(圖S6，見本文支持信息)，利用三倍標(biāo)準(zhǔn)差法，推測出探針分子對Cu2+離子的檢出限分別為8.4×10－9mol/L(L1)和1.0×10－8mol/L(L2)，該檢出限遠(yuǎn)低于美國環(huán)境保護(hù)署(EPA)對飲用水中Cu2+離子安全線規(guī)定(2×10－5mol/L)［34］的要求，表明2種探針分子都可開發(fā)作為飲用水和工業(yè)排放廢水中Cu2+離子檢測或監(jiān)控的熒光探針．

2．3競爭離子和pH值對體系的干擾

為了考察探針在實(shí)際復(fù)雜環(huán)境下對Cu2+離子的選擇性響應(yīng)，進(jìn)行了競爭離子的干擾實(shí)驗(yàn)．實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖4)表明，在5倍濃度的競爭金屬離子(Ag+，Al3+，Ca2+，Cd2+，Co2+，Cr3+，F(xiàn)e2+，F(xiàn)e3+，Hg2+，K+，Mg2+，Na+，NH+4，Ni2+，Pb2+和Zn2+)存在下，探針分子仍可與5倍濃度的Cu2+離子發(fā)生較穩(wěn)定的熒光開啟行為．如圖4所示，除了Ag+(對L1)，Ni2+和Co2+(對L2)離子對探針分子的干擾達(dá)到約15%以外，其余離子的存在均對探針分子L1和L2的熒光識別體系的影響較小，它們之間變化差值均在12%以內(nèi)．這說明2種探針分子的抗離子干擾能力都較強(qiáng)，是實(shí)際環(huán)境檢測中良好的Cu2+離子識別探針．此外，還考察了不同pH體系對探針分子離子識別的影響．由圖5可見，在未加入Cu2+離子時(shí)，探針分子L1和L2在pH=5～12范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度基本保持不變;而在加入5倍濃度的Cu2+離子后，探針分子L1和L2在pH=6～8范圍內(nèi)都能保持相對穩(wěn)定的熒光變化，說明它們在此范圍內(nèi)對體系pH變化不敏感．以上結(jié)果表明，探針L1和L2可分別在弱酸至弱堿的環(huán)境下直接用于Cu2+離子的檢測．

2．4識別機(jī)理

通常情況下，羅丹明類染料形成的內(nèi)酰肼螺環(huán)結(jié)構(gòu)對銅離子的識別是通過Cu2+離子對探針分子結(jié)構(gòu)中的內(nèi)酰肼螺環(huán)結(jié)構(gòu)進(jìn)行水解，恢復(fù)氧雜蒽的π-共軛體系實(shí)現(xiàn)的［27］．由于探針分子L1和L2結(jié)構(gòu)相似，本文以探針分子L1與Cu2+離子作用后的高分辨質(zhì)譜為代表，說明2種探針分子的識別機(jī)理(圖S7，見本文支持信息)．探針分子L1在識別Cu2+離子時(shí)熒光行為開啟，表明Cu2+離子與羥乙基酰肼的NO2識別位點(diǎn)結(jié)合后，打開了探針分子L1中的螺環(huán)結(jié)構(gòu)，隨著Cu2+離子進(jìn)一步水解羥乙基酰肼，溶液變?yōu)橐粤_丹明B為主的體系．質(zhì)譜中有明顯的羅丹明B產(chǎn)物分子的高分辨質(zhì)譜峰(m/z443.2347)以及少量沒有發(fā)生水解反應(yīng)的探針分子L1的質(zhì)譜峰(m/z500.2738)．這些數(shù)據(jù)證實(shí)了Cu2+離子催化并水解機(jī)理的正確性．另外，為了進(jìn)一步分析探針L1對Cu2+離子的識別模式，向含有探針分子L1(1×10－6mol/L)和Cu2+離子(1.5×10－5mol/L)體系中加入30倍濃度的S2－離子，發(fā)現(xiàn)熒光強(qiáng)度并沒有減弱(圖S8，見本文支持信息)，表明Cu2+離子和探針分子L1發(fā)生了不可逆的水解反應(yīng)而非可逆的配位結(jié)合模式．

2．5細(xì)胞內(nèi)Cu2+離子的熒光成像檢測

由于探針分子L1和L2對Cu2+離子具有高靈敏度的熒光開啟性能，同時(shí)它們又具有潛在的膜通透性(良好的水溶性)，因此利用激光共聚焦顯微鏡考察了2種探針分子對β-胰島細(xì)胞(INS-1細(xì)胞)中Cu2+離子的成像行為．從圖6和圖7可以看出，探針分子L1和L2能夠順利進(jìn)入細(xì)胞對Cu2+離子進(jìn)行成像．由圖6(A)可見，探針分子L1(2×10－7mol/L)和細(xì)胞共培養(yǎng)30min后，無死細(xì)胞出現(xiàn)，并且細(xì)胞Fig．6Brightfieldimages(A，D)，fluorescenceimagesandoverlayimages(C，F(xiàn))ofINS-1cellsincubatedwithL1aswellasL1andCu2+(D—F)Excitationwavelength:559nm．形貌無明顯變化，說明L1毒性低，對細(xì)胞生長不產(chǎn)生影響．在559nm波長的激光激發(fā)下，并未觀察到明顯的熒光發(fā)射信號［圖6(B)和(C)］;相反，盡管在加入2×10－6mol/L的Cu2+離子孵育30min后細(xì)胞形貌無明顯變化［圖6(D)］，但在激光共聚焦顯微鏡下可觀察到細(xì)胞中的部分區(qū)域呈現(xiàn)顯著紅色熒光信號［圖6(E)］．通過比較明場和暗場熒光重疊圖可以看出，強(qiáng)熒光信號發(fā)射主要集中在核周區(qū)的細(xì)胞質(zhì)處中［圖6(F)］，該結(jié)果充分表明探針分子L1進(jìn)入細(xì)胞后主要集中在細(xì)胞質(zhì)中，可與進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中的Cu2+離子作用，將探針分子L1中的螺環(huán)內(nèi)酰肼結(jié)構(gòu)水解，恢復(fù)氧雜蒽的π共軛體系從而實(shí)現(xiàn)熒光信號開啟型檢測細(xì)胞質(zhì)中的Cu2+離子．同樣，探針分子L2呈現(xiàn)與L1相同的熒光成像識別檢測行為(見圖7)，在488nm波長激光的激發(fā)下，加入Cu2+離子前，并未在細(xì)胞中觀察到明顯的熒光發(fā)射信號［圖7(B)和(C)］;加入Cu2+離子共培養(yǎng)后，L2在INS-1細(xì)胞的核周區(qū)呈現(xiàn)顯著的綠色熒光信號，表明探針L2進(jìn)入細(xì)胞后主要分布在細(xì)胞質(zhì)中［圖7(E)和(F)］．以上結(jié)果表明，探針分子L1和L2均具有良好的細(xì)胞通透性和低毒性，可作為細(xì)胞內(nèi)Cu2+離子熒光成像檢測的熒光探針．

3結(jié)論

分別以羅丹明B和羅丹明6G為熒光信號報(bào)告基團(tuán)，設(shè)計(jì)合成了以羥乙基肼增強(qiáng)水溶性的高靈敏度、高選擇性反應(yīng)型Cu2+離子熒光探針L1和L2．通過Cu2+離子催化水解控制氧雜蒽熒光信號的螺環(huán)酰肼基團(tuán)，探針L1和L2對Cu2+離子表現(xiàn)出獨(dú)特的熒光開啟型識別檢測行為和對常見離子的抗干擾能力，檢出限分別達(dá)到10－8mol/L和10－9mol/L量級，滿足環(huán)保部門對飲用水中Cu2+離子檢出限的要求．同時(shí)，由于探針具有良好的細(xì)胞穿透能力和低毒性，以L1和L2為熒光檢測探針實(shí)現(xiàn)了對β-胰島細(xì)胞(INS-1細(xì)胞)中Cu2+離子的熒光成像檢測．總之，L1和L2為高靈敏度、高選擇性反應(yīng)型Cu2+離子熒光探針，具有開發(fā)為實(shí)際應(yīng)用前景的銅離子熒光探針和活細(xì)胞中Cu2+離子熒光成像檢測探針的潛力．

作者:米小龍 焦曉潔 劉暢 何松 曾憲順 單位:天津理工大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院