?；切苋パ跄懰嵊嘘P物質的合成范文

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《化學試劑雜志》2016年第一期

摘要:

為加強對牛磺熊去氧膽酸原料藥和制劑產品的質量控制，合成了可能存在的兩個有關物質:牛磺鵝去氧膽酸和牛磺石膽酸，結構經1HNMR和MS確證，并通過高效液相色譜儀建立了?；切苋パ跄懰嵊嘘P物質的分析方法，可為化學藥的仿制研究及其原料藥與制劑的質量控制提供依據和參考。

關鍵詞:

牛磺熊去氧膽酸;有關物質;合成;結構確證

?；切苋パ跄懰?Tauroursodeoxycholicacid)(1)，化學名為2-{［(3，5)-3，7-二羥基-24-氧代膽甾烷-24-基］氨基}乙烷磺酸二水合物，結構式如下所示。由意大利貝思迪大藥廠(BruschettiniS.R.I.)研制，1991年首次在意大利上市，2007年以商品名滔羅特(Taurolite)獲準在中國銷售，臨床主要用于治療膽囊膽固醇結石、原發硬化性膽管炎、原發膽汁性肝硬化和慢性丙型病毒性肝炎等。卓超等［1，2］報道，?；切苋パ跄懰岬暮铣删孕苋パ跄懰釣樵蟻磉M行。中國藥典(2015版)對熊去氧膽酸質量規定中，要求控制鵝去氧膽酸、石膽酸的含量。在制備牛磺熊去氧膽酸過程中，原料熊去氧膽酸中若含有鵝去氧膽酸和石膽酸，會生成對應的?；蛆Z去氧膽酸和牛磺石膽酸。為了對?；切苋パ跄懰嵩纤幖爸苿┻M行質量控制，需要制備與其有關物質作為對照品。Venturoni等［3］以鵝去氧膽酸為原料，使用2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氫喹啉(EEDQ)作為縮合試劑來合成?；蛆Z去氧膽酸鈉，產率93%。鄧勇等［4］使用2，2'-二硫二吡啶、2，2'-二硫二苯并噻唑或胱胺類化合物合成活性硫酯，再用?；撬岚方庵苽渑；蛆Z去氧膽酸和?；鞘懰?，產率為76%～85%。上述方法或存在試劑價格昂貴(如EEDQ)，或存在二硫化試劑的使用易造成后處理繁瑣且產品收率及純度很難提高等問題。本研究參考文獻［5-9］對合成方法進行改進，以鵝去氧膽酸(1)為原料，在三乙胺作用下與氯甲酸異丁酯反應形成混酐，后在堿性條件下與牛磺酸反應形成牛磺鵝去氧膽酸鈉，用鹽酸酸化后制得牛磺鵝去氧膽酸(有關物質A)，重結晶后收率為92%。參照牛磺鵝去氧膽酸的合成，以石膽酸(2)為原料制得了牛磺石膽酸(有關物質B)，收率93%，合成路線如下所示。并建立了一種用于有關物質純度檢測的HPLC分析方法，經檢測有關物質A和B的純度均在98.5%以上。

1實驗部分

1.1主要儀器與試劑Mercury400型核磁共振儀(美國Varian公司);電噴霧三重四級質譜儀(美國Waters公司);TektronixX-4型熔點儀(溫度計未經校正，北京泰克儀器有限公司);Agilent1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫科技公司);魯道夫I型旋光儀(美國魯道夫公司)。?；切苋パ跄懰釋φ掌?編號110846-200506，中國藥品生物制品檢定所);其他試劑均為分析純。

1.2合成方法

1.2.1牛磺鵝去氧膽酸的合成于100mL圓底燒瓶中加入10.0g(25.5mmol)鵝去氧膽酸和60mL丙酮，攪拌溶解后冰水浴降溫至0℃，然后加入3.1g(30.6mmol)三乙胺，控制內溫0～5℃，滴加3.85g(28.1mmol)氯甲酸異丁酯。滴加完畢，室溫攪拌，TLC檢測反應至結束，抽濾，得鵝去氧膽酸活性酸酐濾液待用。將1.3g(30.5mmol)氫氧化鈉溶解在30mL水中，加入3.19g(25.5mmol)?；撬幔^續攪拌30min后，將其滴加到上述鵝去氧膽酸活性酸酐的濾液中，室溫反應5h。反應畢，減壓蒸除丙酮。瓶內剩余物，用5%鹽酸調至pH3～4，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。水相攪拌下緩慢加入5mL濃鹽酸酸化，20℃下攪拌16h，抽濾，濾餅50℃減壓干燥，得?；蛆Z去氧膽酸粗品(約12.5g)，收率98%。

1.2.2?；鞘懰岬暮铣梢?.0g(13.3mmol)石膽酸和1.6g(16.0mmol)三乙胺、2.0g(14.6mmol)氯甲酸異丁酯、1.62g(13.3mmol)?；撬釣樵?，按照有關物質A的制備方法制，得6.0g白色固體，總收率93%，純度98.7%(HPLC)，m.p．212～214℃，［α］20D=+27.5°(c=1.0，EtOH)［文獻［3］值:m.p．210～212℃，［α］20D=+27.9°(c=1.0，EtOH)］。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)，δ:0.68(s，3H);0.91(s，3H);0.98(d，3H，J=4.2Hz);0.99～1.12(m，2H);1.20～1.60(m，15H);1.61～1.71(m，4H);1.81～1.86(m，2H);1.93～1.96(m，2H);2.07～2.18(m，2H);2.28～2.35(m，1H);3.05(t，2H，J=7.2Hz);3.45(m，1H);3.55(t，2H，J=7.2Hz)。ESI-MS，m/z(%):484.3［M+H］+。

1.3高效液相色譜檢測方法?；切苋パ跄懰帷⑴；蛆Z去氧膽酸和牛磺石膽酸，用流動相分別配制成0.5mg/mL供試液?；旌弦簽榉謩e取上述3個供試液等體積混合而成。色譜柱:WelchromC18柱(4.6mm×250mm，5μm);流動相:V(0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液)∶V(甲醇)=30∶70;檢測波長:202nm;流速:1mL/min;柱溫:30℃;進樣量:5μL。

1.3.1高效液相色譜分析利用上述高效液相色譜檢測方法對?；切苋パ跄懰釋φ掌?、?；蛆Z去氧膽酸、?；鞘懰峒盎旌蠘舆M行液相色譜分析，檢測結果如圖1、2所示。由圖1、2可以看出，該分析方法用來作為?；切苋パ跄懰嵊嘘P物質的檢測方法可靠性高，3者混合樣品分離效果好，可為?；切苋パ跄懰岬姆轮蒲芯考捌湓纤幣c制劑的質量控制提供依據和參考。

2結果與討論

2.1縮合劑的選擇對反應收率的影響保持其他實驗條件不變，分別使用氯甲酸乙酯、氯甲酸正丙酯、氯甲酸正丁酯、氯甲酸異丁酯作縮合劑，研究了不同縮合劑對反應收率的影響，實驗結果見表1。由表1可以看出，當縮合劑選用氯甲酸乙酯、氯甲酸正丙酯和氯甲酸正丁酯時，由于其活性較高，底物分子中醇羥基可能與之反應生成副產物，導致總反應收率偏低;當選用氯甲酸異丁酯作為縮合劑時，其反應活性較低，能高選擇性地發生反應，重結晶后總收率高達92%以上。

2.2物料物質的量比對反應收率的影響為考查形成活性酸酐過程中氯甲酸異丁酯用量對收率的影響，固定原料鵝去氧膽酸10.0g(25.5mmol)、三乙胺3.1g(30.6mmol)、60mL丙酮，改變氯甲酸異丁酯的投料量，實驗結果見表2。由表2可以看出，隨著氯甲酸異丁酯與鵝去氧膽酸物質的量比的增大，收率明顯增大，當n(原料)∶n(氯甲酸異丁酯)≥1∶1.2時，收率降低。故選用鵝去氧膽酸與氯甲酸異丁酯的物質的量比為1∶1.1。

2.3溶劑種類對反應收率的影響保持其他實驗條件不變，本實驗分別選用二氧六環、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺作為溶劑，研究了不同溶劑對產物收率的影響，結果如表3所示。采用二氧六環作為反應溶劑時，從TLC結果可知生成活性酸酐的純度較差，進而導致反應收率較低;選用N，N-二甲基甲酰胺作為反應溶劑，總反應收率較高，但后處理過程中需蒸出高沸點的N，N-二甲基甲酰胺;選用丙酮作為反應溶劑時，生成活性酸酐純度高，經胺解轉化為產物收率高達92%以上，同時其沸點低，易蒸餾出來循環使用。

2.4溫度的影響保持其他實驗條件不變，本實驗研究了不同反應溫度對產物收率的影響。從表4可以看出，當反應溫度維持在10℃時，活性酸酐的胺解進行較慢，可能有部分活性酸酐在堿性條件下發生水解重新變為原料，而無法生成產物;反應溫度在30℃時，胺解反應進行順利，收率較高;反應溫度在50℃時，反應收率較低，可能的原因是溫度較高、活性酸酐水解加快，不利于產物的形成。因此選擇30℃作為最佳反應溫度。

3結論

本研究分別以鵝去氧膽酸與石膽酸為原料，選用氯甲酸異丁酯作為縮合劑，經過兩步反應以高產率制得有關物質牛磺鵝去氧膽酸和牛磺石膽酸，并建立了相關液相分析方法，可應用于?；切苋パ跄懰岬姆轮蒲芯考捌湓纤幣c制劑的質量控制中。

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作者：李永 曹俊 金幸 朱高峰 王建塔 湯磊 單位：貴州醫科大學 藥學院 上海慈瑞醫藥科技有限公司