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    羥基磷灰石牙膏對早期齲的修復范文

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    羥基磷灰石牙膏對早期齲的修復

    《日用化學工業》2014年第五期

    1實驗部分

    1.1主要試劑與儀器HA,12μm,南京都萊生物技術有限公司;摻HA碳酸鈣牙膏,摻HA的質量分數為3%,與普通碳酸鈣牙膏混合制成;普通碳酸鈣牙膏(不含HA),佛山市口腔護理用品工程技術中心;四水硝酸鎘,廣州化學試劑廠。電子天平,德國Sartorius公司;雙向磁力攪拌器,德國Ika公司;恒溫干燥箱,德國Heraeus公司;帶能譜S-3700N場發射掃描電子顯微鏡,日本Hitachi公司;電鏡噴金儀,北京和同創業科技公司;電感藕合等離子發射光譜儀,美國Leeman公司;顯微硬度計,上海光學儀器五廠;氣化恒溫箱,北京北瑞達醫藥科技有限公司。

    1.2對早期齲的修復實驗方法

    1.2.1實驗標本收集與制備于廣東省某口腔醫院口腔頜面外科門診收集16~26歲患者因正畸治療拔除的前磨牙20顆(經患者知情同意),檢查牙冠基本完整,未見明顯損壞及裂紋,未曾進行牙體、牙髓和修復性治療。用刮匙仔細去除牙齒周圍軟組織,刷洗干凈,儲存于中性10%甲醛溶液中備用。牙冠頰側和舌側釉質表面用拋光布輪和浮石粉拋光至鏡面狀。在每個標本頰側制備2個、舌側制備1個2mm×2mm大小的實驗窗口,作為再礦化1和2周觀察窗口及對照窗口,窗口外的其余部分用抗酸指甲油和嵌體蠟封閉。

    1.2.2脫礦將標本放入配制好的脫礦液(脫礦液為乳酸羧甲基纖維素鈉膠狀液,其中乳酸的濃度為0.1mol•L-1,羧甲基纖維素鈉的質量分數為3%,用0.1mol•L-1的NaOH溶液調節pH=4.00)中,同時置于37℃恒溫水浴箱中脫礦48h。脫礦后將標本取出用去離子水仔細清洗3min,室溫下干燥30min。用抗酸指甲油和嵌體蠟封閉各標本的頰側1個窗口,作為對照窗口。

    1.2.3再礦化將20個標本隨機分為2組,即空白牙膏組和摻HA牙膏組,每組各10顆。將2組標本分別浸泡于質量濃度均為10g•L-1的2種牙膏懸浮液中,放入37℃恒溫水浴箱中進行再礦化。每天更換新鮮懸浮液,再礦化1周后隨機選擇頰側或舌側1個窗口用去離子水清洗,作為再礦化1周觀察窗口,將其用抗酸指甲油和嵌體蠟封閉,標本繼續浸泡在各懸浮液中。再礦化2周后用丙酮、無水乙醇去除各窗口的抗酸指甲油和嵌體蠟,去離子水清洗各窗口,室溫下干燥。

    1.2.4掃描電鏡觀察從各組隨機抽取5個標本作為掃描電鏡觀察用。抽取標本使用松風車針冷水冷卻下截去牙根、去冠髓,近遠中向剖開牙冠,留頰舌側釉質塊,將各標本按組編號,自來水沖洗2h后,蒸餾水沖洗,置于干燥箱中干燥24h。干燥后的標本觀察窗口面向上固定于載物臺上,粘臺,真空下干燥,表面噴金,每個標本隨機選取3個不同區域進行掃描電鏡觀察,并在不同放大倍數下拍攝電鏡圖像并存儲。

    1.2.5顯微硬度檢測從各組標本及正常釉質、脫礦釉質中隨機抽取5個標本,拋光,然后將標本固定于顯微硬度計平臺上,使標本面與平臺相平行。使用壓頭,負荷50g,負荷時間10s,每個釉質表面測試5個點,記錄顯微硬度值。

    1.3鎘離子吸附實驗方法

    1.3.1標準鎘離子儲備液的制備準確稱取四水硝酸鎘0.549g,去離子水溶解后,移入1L容量瓶中,加去離子水至刻度,搖勻,此溶液中鎘離子的質量濃度為0.2g•L-1。吸取1mL質量濃度為0.2g•L-1的鎘離子溶液置于1L容量瓶中,加去離子水至刻度,搖勻,配制成質量濃度為0.2mg•L-1的鎘離子溶液。

    1.3.2牙膏懸液的配制稱取1g各組牙膏分別置于燒杯中,量筒各量取50mL去離子水加入燒杯,以磁力攪拌器攪拌均勻(實驗過程中牙膏懸液一直處于攪拌均勻狀態),得20g•L-1的牙膏懸液。移液槍吸取0.025,0.050,0.100,0.200,0.300,0.400,0.500,0.600,0.700和0.800mL質量濃度為20g•L-1的牙膏懸液,再分別加入0.975,0.950,0.900,0.800,0.700,0.600,0.500,0.400,0.300和0.200mL去離子水混合配制成質量濃度分別為0.5,1,2,4,6,8,10,12,14和16g•L-1的牙膏懸液。

    1.3.3鎘離子吸附取50mL初始質量濃度為0.2mg•L-1的鎘離子溶液10份為1組,共2組,即摻HA牙膏組和空白牙膏組,每組加入1mL質量濃度分別為0.5,1,2,4,6,8,10,12,14和16g•L-1的相應牙膏懸液,于25℃下,用搖床攪拌3h(300r•min-1),靜置24h。將溶液置于離心機中離心(轉速為3000r•min-1,溫度為25℃)10min,過濾,吸取濾液15mL,電感藕合等離子發射光譜儀測定殘余重金屬離子質量濃度,按下式計算鎘離子吸附率。式中P為吸附率,%;ρt為水樣中鎘離子的質量濃度,mg•L-1;ρo為鎘離子溶液的初始質量濃度,mg•L-1;Vt為反應體系的體積,mL;Vo為未反應前鎘離子溶液的體積,mL。

    1.4統計分析運用13.0版SPSS統計軟件包進行t檢驗統計分析,檢驗標準取α=0.05。

    2結果與討論

    2.1掃描電鏡觀察結果圖1為2組牙釉質再礦化掃描電鏡照片。掃描電鏡下正常釉質面可見致密光滑平整的釉柱面,釉柱間隔呈暗影網狀規則分布(圖1a)。對釉質進行脫礦處理后,釉質表面呈現明顯的酸蝕狀外觀,釉柱尾部溶解脫礦,逐步向頭部擴展,邊界清晰,呈典型的蜂窩狀、魚鱗狀、多孔隙的缺損,而且大部分表現為向心性脫礦。部分釉柱尾部溶解比較嚴重,使釉柱尾結構消失,殘留部分頭部結構(圖1b)。由圖1可見,處理1周后,空白牙膏組(圖1c)釉質表面與處理前結構相似,變化不大,蜂窩結構處未見明顯礦物質沉積,脫礦區未見明顯縮小;摻HA牙膏組(圖1d)表面釉質脫礦區四周邊緣可見類似礦物質沉積,與正常釉質結構鑲嵌緊密,致使脫礦區直徑明顯縮小,部分蜂窩結構可見少量顆粒狀礦化結節封閉。經2周再礦化后,空白牙膏組(圖1e)蜂窩結構面積稍減小,邊緣表面有少量不規則物質沉積,但釉質蜂窩結構仍清晰可見;摻HA牙膏組(圖1f)脫礦區礦物質沉積量逐漸增加,條狀、顆狀及其他不規則形狀物質沉積,覆蓋脫礦釉質表面,蜂窩結構基本消失。近年來,國外研究者發現HA具有美白牙齒、抗牙本質過敏和預防牙周病發生的作用,但對HA作用具體機制的研究不多。以往文獻報道掃描電鏡下觀察釉質脫礦后主要有邊緣性脫礦和向心性脫礦2種形式,電鏡下可見蜂窩狀或魚鱗狀等表現。筆者實驗中各組標本主要為向心性脫礦,沿著釉質尾部開始溶解脫礦,逐漸向頭部溶解,呈現明顯的蜂窩狀表現,部分標本表現為不規則脫礦形式,電鏡下可見釉質表面晶體結構的崩解或坍塌,甚至消失。經過再礦化處理后,電鏡下觀察可見各組樣本表面脫礦區四周邊緣均有礦物質沉積,且礦物質沉積量隨時間延長逐漸增加。該現象證實HA通過再礦化對早期齲有修復作用,且隨時間延長作用效果逐漸增強。電鏡下可見摻HA牙膏組脫礦釉質表面有球狀、條狀及其他不規則物質沉積,而空白牙膏組雖然有不規則的物質沉積于脫礦釉質表面,但仍可見蜂窩結構存在。筆者認為空白牙膏組所形成的沉積物可能是牙膏本身所具有的堵塞效應,具有輕微的再礦化功能。

    2.2釉質塊顯微硬度檢測結果標本脫礦后的釉質塊的平均顯微硬度值為185.60±30.67,再礦化1和2周后顯微硬度值的統計結果見表1。由表1可知,摻HA牙膏組標本再礦化處理前與處理1周后的平均顯微硬度值差別具有統計學意義(P=0.000<0.05),空白牙膏組標本再礦化處理前與處理1周后的平均顯微硬度值差別無統計學意義(P=0.123>0.05);摻HA牙膏組顯微硬度值再礦化處理1和2周的差別具有統計學意義(P=0.002<0.05),空白牙膏組硬度值1和2周的差別無統計學意義(P=0.954>0.05)。有相關研究證明牙釉質脫礦后表面硬度明顯下降,而經過再礦化處理,脫礦后的牙釉質可重新硬化。實驗結果顯示摻HA牙膏組脫礦后釉質表面顯微硬度值也是明顯下降,當經過再礦化后,顯微硬度值明顯升高,并具有統計學意義。同時結果進一步證實,各組標本再礦化后表面顯微硬度值隨再礦化時間延長而逐漸增加,可見HA對早期齲有較好的修復作用。牙釉質的基本結構是釉柱,由扁六棱柱的HA晶體構成,這使得HA與其具有相近的結構,對脫礦釉質進行修復存在理論上的可能。臨床上發現齲變表面較同一牙正常牙面電位低,脫礦區為高的負電位,而HA具有高靜電場特性,使其具有良好的再礦化作用。因此,以上HA與脫礦牙釉質的特性增加了HA直接填充牙齒脫礦區缺陷和微孔的可能性。

    2.3牙膏對鎘離子的吸附情況表2給出了摻HA牙膏和空白牙膏對鎘離子的吸附情況。從表2中可見,不同質量濃度下的摻HA牙膏懸液對鎘離子的吸附率均高于空白牙膏懸液,即摻HA后,牙膏對鎘離子的吸附效能提高。除筆者項目組前期研究外,國內外尚未見有牙膏吸附重金屬離子的研究。在前期證實摻HA牙膏可吸附鉻離子的基礎上,證實摻HA牙膏還可吸附鎘離子,牙膏中摻入3%的HA,對鎘離子的吸附能力平均提高10%。由此,可望在牙膏中添加HA,除了發揮其口腔保健功效外,刷牙后的牙膏廢液流入下水道,還有可能吸附污水中的重金屬離子,從而為人們的刷牙行為賦予環保意義。同時,還需進一步研究在保證良好的口腔保健功效的基礎上,如何提高牙膏對重金屬離子的吸附能力。

    3結論

    1)摻HA牙膏對脫礦早期釉質齲具有較佳的再礦化效果,掃描電鏡觀察釉質表面變光滑,蜂窩結構基本消失,同時可以提高人工齲表面的顯微硬度,較脫礦后和空白牙膏組增加,具有統計學意義(P<0.05)。2)摻HA牙膏對模擬廢水中的鎘離子較之普通牙膏具備更強的吸附能力。

    作者:馬偉群黃建生徐平平單位:南方醫科大學附屬口腔醫院廣東省口腔醫院

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