醫學實踐論文范文
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第1篇
（一）醫學類大學生社會實踐與志愿服務工作的內容
社會實踐與志愿服務工作主要是根據學生所學醫學專業的特點，為醫院患者或者社區群眾開展衛生宣傳教育和衛生診療服務等，從而提高學生將自身的專業知識運用到實踐的能力，以便為社會和群眾提供更多的服務。社會實踐與志愿服務工作的內容主要為圍繞醫學知識宣講和醫療服務等方面開展。
（二）醫學類大學生社會實踐與志愿服務工作的模式
1.參觀教育模式。學校組織醫學生到一些大型的醫院中進行參觀，主要包括醫生的診治過程、手術過程等觀察，讓醫學生充分認識到醫療工作的重要性，切實提高廣大醫學生的敬業精神。
2.服務奉獻模式。組織廣大醫學生深入敬老院、福利院、孤兒院、兒童聾啞學校等社會福利組織中，為這些人群開展各項醫療和衛生服務工作，從而幫助他們切身感受到這些特殊人群生活的疾苦，不斷提高醫學生的道德素養。
3.專題調研模式。在導師的帶領下，將醫學生劃分成若干專題研究小組，主要進行對醫學的研討和社會調查活動等等，主要是為了培養廣大醫學生社會認知能力和科學研究能力[1]。4.其他模式。醫學類大學生開展社會實踐與志愿服務的模式還包括送藥、送醫以及送衛生知識下鄉等。
二、醫學類大學生社會實踐和志愿服務工作模式存在的問題
（一）社會實踐和志愿服務工作模式單一
當前醫學類大學生社會實踐和志愿服務工作模式相對單一，主要是以下兩個原因：一是個別學生參與社會實踐和志愿服務的積極性不高；二是個別醫學院還不能充分意識到社會實踐和志愿服務工作的重要性，并缺乏針對社會實踐和志愿服務考核體系，不能在醫學生中產生較大的教育意義。
（二）社會實踐和志愿服務脫離實際
從當前個別醫學院開展的社會實踐和志愿服務工作來看，很多都是根據教學課程安排的需要，缺乏將社會實踐和志愿服務跟實際有效結合起來。
（三）社會實踐和志愿服務專業性不強
個別醫學院的組織者在開展社會實踐和志愿服務過程中不能有效將活動內容跟學生的專業、社會熱點的話題充分結合起來。
三、提高醫學類大學生社會實踐和志愿服務區的效果的重要途徑
（一）加強社會實踐和志愿服務的宣傳工作
作為醫學院，要充分利用社會媒體加強對醫學生社會實踐和志愿服務的宣傳力度，從而幫助社會及時了解醫學生參與社會實踐和志愿服務的重要性，進一步為學生參與社會實踐和志愿服務創造良好的氛圍。另外，醫學院還應該充分利用自身的校園網、宣傳欄、廣播等宣傳在社會實踐和志愿服務表現突出的團體和個人，從而充分調動學生參與社會實踐和志愿服務的積極性和熱情。
（二）豐富社會實踐和志愿服務的模式
由于低年級的醫學生自身的專業知識有限，業余時間少，學校在組織這部分學生參與社會實踐和志愿服務時應該進一步創新社會實踐和志愿服務的模式，在充分整合社會和校園的各方資源的基礎上，為其創造一個相對穩定的醫學生實踐基地，并建立起具有醫學生社會實踐和志愿服務特色的創新機制，充分培養醫學生的組織、協調以及溝通能力[2]。
（三）加強社會實踐和志愿服務制度建設
組織廣大醫學類大學生參與社會實踐和志愿服務不但可以幫其深入基層、了解社會，還可以提高他們的專業知識。因此醫學院應該進一步加強醫學類大學生社會實踐和志愿服務工作的制度建設，爭取從動員——申報立項——時間團隊資料審批——實踐團長安全教育整個過程能夠得到有效的監督和指導，提高醫學生社會實踐和志愿服務工作的效果。
總結
第2篇
ExpressionandbiologicalactivityofmouseWnt3ageneinNIH3T3cells
【Abstract】AIM:ToexpressrecombinantmouseWnt3asignalproteinwithbiologicalactivity.METHODS:Therecombinanteukaryoticexpressionplasmid,pSecTag2/HygroBWnt3a,wastransfectedintoNIH3T3cellsbyliposome,thentheexpressedproteinwasdetectedbyWesternBlot.ThesaturationdensityandthecapabilityofsuppressingapoptosisinWnt3a/NIH3T3cellswereevaluated.RESULTS:TheWnt3asignalproteinwasstablyexpressedinWnt3a/NIH3T3cells.ThesaturationdensityandthecapabilityofsuppressingapoptosisinWnt3a/NIH3T3cellsweremarkedlyincreased.CONCLOUSION:WesuccessfullyconstructtherecombinantWnt3asignalproteinwithbiologicalactivity.
【Keywords】Wnt3a;eukaryoticexpression;contactinhibition;apoptosis
【摘要】目的：表達具備生物活性的重組小鼠Wnt3a信號蛋白.方法：應用脂質體轉染試劑將重組真核表達載體pSecTag2/HygroBWnt3a轉染并篩選穩定表達的NIH3T3細胞，WesternBlot鑒定重組Wnt3a蛋白的表達，并對Wnt3a/NIH3T3細胞的融合密度及抗凋亡能力給予檢測.結果：Wnt3a信號蛋白在Wnt3a/NIH3T3細胞中獲得穩定表達，Wnt3a信號蛋白能夠明顯提高NIH3T3細胞的融合密度及抗凋亡能力.結論：在NIH3T3細胞中表達的重組Wnt3a信號蛋白具備生物活性.
【關鍵詞】Wnt3a；真核表達；接觸抑制；細胞凋亡
0引言
小鼠Wnt3a基因是Wnt基因家族中的重要成員，其編碼表達Wnt3a信號蛋白.Wnt3a信號蛋白可以激活經典的Wnt/βcatenin信號通路.Wnt3a信號蛋白對神經干細胞表現出明顯的促神經元分化的作用.我們應用基因重組的方法，從小鼠胚腦中克隆Wnt3acDNA，構建真核表達載體，通過陽離子脂質體試劑將目的基因導入NIH3T3細胞中，建立穩定表達Wnt3a信號蛋白的NIH3T3細胞株，并對其生物學活性進行初步分析.
1材料和方法
1.1材料真核表達載體pSecTag2/HygroBWnt3a由本研究室構建.NIH3T3細胞株由安徽醫科大學病理教研室吳強教授惠贈.多聚賴氨酸購自博士德公司；胎牛血清及DMEM購自Gibco公司.潮霉素及LipofectamineTM2000轉染試劑盒、購自Invitrogen公司.質粒小量提取試劑盒WizardPlusSVMiniprepsDNAPurificationsystem,ReverseTranscriptionSystemRTPCR試劑盒購自Promega公司；鼠抗mycmAb、鼠抗βcateninmAb購自SantaCruz公司，FITC標記的兔抗鼠二抗、TRITC標記的兔抗鼠二抗購自北京中山公司；臺盼藍購自sigma公司.其他試劑均為進口分裝或國產分析純.
1.2方法
1.2.1NIH3T3細胞的培養將凍存的NIH3T3細胞復蘇后用含100g/L的胎牛血清的DMEM培養液，在37℃50mL/LCO2培養箱中培養，3d換液1次,傳代3至4次使細胞達到良好的生長狀態.
1.2.2NIH3T3細胞的轉染按LipofectamineTM2000試劑說明書操作進行.轉染前24h用胰蛋白酶消化貼壁的NIH3T3細胞，再以無血清及無雙抗的DMEM培養基重懸，并按1×105的細胞密度接種于6孔培養板，培養24h后，當細胞生長至85%～90%融合度時，取純化的重組質粒pSecTag2/HygroBWnt3a2μg，溶于250μL無血清的DMEM培養基中，得到A液.取3μLLipofectamineTM2000加于97μL無血清的DMEM培養基中，得到B液.將A,B液混勻，室溫放置30min后加入0.8mL含100g/L胎牛血清的DMEM培養基，輕輕混勻，均勻滴加于經無血清培養基洗滌的貼壁細胞表面，于37℃50mL/LCO2培養箱中培養24h.棄去轉染液，加2mL完全培養液繼續培養.轉染后48h，待細胞生長至接近融合時收集上清，并按1∶3的密度傳代.繼續培養至細胞密度達50%～70%.棄去培養液，更換濃度為600mg/L的潮霉素培養液進行篩選.轉染時，設置轉染空載體pSecTag2/HygroB的組和正常細胞陰性對照組.約14d后，可見有陽性克隆形成，繼續擴增培養.穩定表達Wnt3a蛋白的細胞株命名為Wnt3a/NIH3T3（W/3T3），轉染空載體的細胞株命名為empty/NIH3T3（E/3T3），正常細胞陰性對照組命名為control/NIH3T3（C/3T3）.
1.2.3重組Wnt3a蛋白鑒定轉染48h后，分別收集C/3T3,E/3T3和W/3T3細胞各約1×106及其培養上清液.以SDS煮沸法裂解細胞并收集上清，并將其與細胞培養上清液真空冷凍干燥，濃縮至1/2體積，以鼠抗mycmAb為一抗，HRP標記的山羊抗兔IgG為二抗，使用WesternBlot方法行重組Wnt3a蛋白的鑒定.
1.2.4βcatenin的表達鑒定分別在轉染后6,12,24h收集W/3T3,E/3T3及C/3T3細胞各約1×106，以SDS煮沸法裂解細胞并收集上清，以鼠抗βcateninmAb為一抗，HRP標記的山羊抗兔IgG為二抗，使用WesternBlot方法進行鑒定.
1.2.5Wnt3a/NIH3T3細胞增殖特性的鑒定以密度約1×105接種W/3T3,E/3T3及C/3T3細胞于24孔培養板，隔日觀察，臺盼藍染色并使用血細胞計數板計數活細胞.
1.2.6Wnt3a/NIH3T3細胞抗凋亡實驗以密度約1×105接種W/3T3,E/3T3及C/3T3細胞于24孔培養板，24h后臺盼藍染色并使用血細胞計數板計數活細胞數，同時更換含10g/L胎牛血清的DMEM培養液，定時觀察并臺盼藍染色并使用血細胞計數板計數活細胞，計算存活細胞與原始細胞數的比值.
統計學處理：用SPSS11.5統計軟件進行單因素方差分析.
2結果
2.1重組Wnt3a蛋白在的NIH3T3細胞中獲得表達WesternBlot鑒定發現轉染Wnt3a基因的NIH3T3細胞裂解液中有一Mr約為45×103的特異性條帶，在轉染Wnt3a基因的NIH3T3細胞培養上清液、E/3T3及C/3T3細胞裂解液和細胞培養上清液中，均未發現相應條帶(圖1).
1:W/3T3組細胞裂解液；2：W/3T3組細胞培養上清液；3：E/3T3組細胞裂解液；4：C/3T3組細胞裂解液.
圖1WestemBlot鑒定Wnt3a信號蛋白的表達（略）
2.2Wnt3a/NIH3T3細胞中βcatenin的表達上調對Wnt信號通路中的重要信息分子βcatenin的表達情況進行WesternBlot鑒定，在Mr約90×103處出現特異性條帶(圖2)，但無時間依賴性.
1~3:培養6,12,24h.
圖2各實驗組βcatenin表達（略）
2.3Wnt3a/NIH3T3細胞融合密度明顯增高經臺盼藍染色計數活細胞，以密度約1×105接種的E/3T3及C/3T3細胞3d后生長至融合密度，此時細胞融合密度約4.6×105，但W/3T3細胞繼續生長至第6d，細胞融合密度約13×105，與另外兩組相比，W/3T3細胞融合密度明顯增高（P<0.01）(圖3，4).
A：W/3T3；B：E/3T3；C：C/3T3.
圖3各實驗組細胞融合密度觀察(倒置×100)（略）
2.4W/3T3細胞抗凋亡能力明顯增高經臺盼藍染色計數活細胞，更換含10g/L胎牛血清的培養液48h后，E/3T3及C/3T3細胞大量凋亡，細胞數明顯減少，但W/3T3細胞數無明顯減少，抗凋亡能力明顯提高（P<0.01）(圖5，6).
圖4實驗組細胞數變化（略）
A：W/3T3；B：E/3T3；C：C/3T3.
圖5各實驗組細胞抗凋亡能力觀察(倒置×100)（略）
圖6實驗組存活細胞比例（略）
3討論
Wnt信號蛋白為含有23～24個保守型半胱氨酸殘基,在人類的基因組中已經發現Wnt基因19種［1-2］.Wnt3a是Wnt基因家族的重要成員，其基因早在1992年就已經被發現，而且多種的真核細胞被用于它的表達，但由于其低溶解度及疏水性等特點，一直未能純化出具備生物活性的Wnt3a信號蛋白.1998年，Shibamoto等［3］使用L細胞（鼠胸腺激酶缺陷細胞株；LMTK）作為表達細胞時，在培養上清中發現了大量具備生物活性的Wnt3a蛋白，約400μg/L.Willert等［4］所純化的Wnt3a信號蛋白通過激活Wnt信號通路促使骨髓中的造血干細胞分裂和自我復制，認為Wnt可能在一系列組織的自我更新中起信號作用.
βcatenin是經典的Wnt/βcatenin信號通路中重要的信息分子［5］，其在Wnt信號通路關閉的情況下，βcatenin被磷酸化而迅速降解.Wnt信號通路被激活后，βcatenin在胞內大量聚集，并進入細胞核，啟動下游靶基因的轉錄，產生生物學效應.βcatenin表達的明顯上調代表Wnt信號通路被激活.實驗中WesternBlot鑒定發現βcatenin表達明顯上調，但沒有發現與時間有依賴關系.實驗中表達的重組Wnt3a信號蛋白帶有myc標簽，Burrus等［6］認為如果Wnt3a信號蛋白帶有標簽將影響其活性，甚至失活.但同樣有文獻［7,8］中應用的Wnt3a信號蛋白帶有myc,HA等標簽，而且文獻中對其活性同樣做了詳細的描述.本實驗夠構建的重組Wnt3a信號蛋白具備生物學活性，但未能與野生型（wildtype）Wnt3a信號蛋白活性做詳細的比較，其生物學活性的變化有待進一步分析.
Wnt3a蛋白可以促進神經干細胞向神經元分化.在使用含有Wnt3a信號蛋白的條件培養液培養E11.5d的胎鼠前腦神經干細胞發現，神經干細胞大量分化成為MAP2陽性的神經元.去除Wnt3a信號蛋白后，神經干細胞恢復增殖能力，而且當條件培養液中的FGF2去除后，分化的神經元形態更為成熟［8-9］.來源于小鼠大腦皮質的神經干細胞轉基因后超表達Wnt信號蛋白，即使在培養液中加入FGF2，依然大量向神經元分化，但阻斷Wnt信號通路后神經元的分化被抑制［10］.
Wnt信號通路的生物學作用十分復雜，不同的Wnt基因，不同的細胞，甚至不同的細胞狀態都有可能產生不同的作用［11］.在本實驗中我們采用pSecTag2/HygroBWnt3a真核表達載體，NIH3T3細胞作為表達細胞，成功表達重組Wnt3a信號蛋白，初步探討了Wnt3a信號蛋白的生物學活性，為進一步建立用于以治療為目的的分子移植的方法奠定基礎.
【參考文獻】
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第3篇
EffectsofoctylphenoloncellcycleandcyclinexpressionofMDAMB231breastcancercells
【Abstract】AIM:Toobservetheeffectsofoctylphenol(OP)oncellcycleandcyclinexpressionofMDAMB231breastcancercellsandtoprobethemolecularmechanismsofOPinhibitingMDAMB231breastcancercellproliferation.METHODS:Thechangesofcellproliferation,cellcycle,cyclinD1mRNA,cyclinD3mRNA,CDK2mRNA,CDK4mRNAandcyclinD1proteinexpressionsofMDAMB231cellstreatedwithOPwereobservedbyusingMTTtest,flowcytometry,immunocytochemistryandRTPCR.RESULTS:WhenMDAMB231breastcancercellsweretreatedwith4or8μmol/LOPfor48h,thecellinhibitionrateswere(17.13±4.1)%,(40.25±8.7)%,andthefluorescencevaluesofcyclinD1were55.1±10.2,41.4±11.2,significantlydecreasedascomparedwithcontrolgroup(89.9±11.2,P<0.05).WhenMDAMB231breastcancercellsweretreatedwith8μmol/LOPfor24and72h,thecellratiosintheG0/G1phasewere(67.0±17.6)%and(44.4±11.9)%，significantlyincreasedascomparedwithcontrolgroup［(46.6±12.8)%at24h,(15.3±3.1)%at72h,P<0.05］.OPinhibitedthemRNAexpressionsofcyclinD1,cyclinD3,CDK2andCDK4andtheproteinexpressionofcyclinD1.CONCLUSION：OPcaninhibittheproliferationofMDAMB231breastcancercells,whichmayberelatedtodownregulatingtheexpressionsofcyclinD1,cyclinD3,CDK2andCDK4mRNAandcyclinD1protein.
【Keywords】cellproliferation;breastneoplasms;octylphenol;cyclinD1；cylindependentkinases
【摘要】目的:觀察辛基酚(OP)對細胞周期及周期蛋白表達的影響，探討OP抑制MDAMB231乳腺癌細胞增殖的可能分子機制.方法：以MTT試驗、流式細胞分析、免疫細胞化學和RTPCR等方法觀察OP對MDAMB231乳腺癌細胞增殖、細胞周期、CDK2，CDK4，cyclinD1和cyclinD3表達的影響.結果：4,8μmol/LOP作用MDAMB231乳腺癌細胞48h時，其抑制率為(17.1±4.1)%,(40.3±8.7)%，cyclinD1表達量熒光值為55.1±10.2，41.4±11.2，比對照組(89.9±11.2)明顯降低(P<0.05).8μmol/LOP作用MDAMB231乳腺癌細胞24h和72h，G0/G1期細胞為(67.0±17.6)%和(44.4±11.9)%，G0/G1期細胞比對照組［24h，(46.6±12.8)%；72h，(15.3±3.1)%］明顯增高(P<0.05).OP導致MDAMB231乳腺癌細胞中CDK2，CDK4，cyclinD1和cyclinD3mRNA的表達降低，且cyclinD1蛋白的表達也降低.結論：OP能抑制MDAMB231乳腺癌細胞增殖，其機制可能與OP能降低乳腺癌細胞中CDK2，CDK4，cyclinD1和cyclinD3mRNA及其蛋白的表達有關.
【關鍵詞】細胞增殖;乳腺癌;辛基酚；細胞周期蛋白D1;細胞周期蛋白質依賴激酶類
0引言
辛基酚（octylphenols,OP）是一種環境雌激素，近年來對它的雌激素活性檢測及其生殖毒性效應研究較多［1］.OP能促進ERα+MCF7乳腺癌細胞的增殖，表現雌激素活性，卻抑制ERα-MDAMB231乳腺癌細胞的增殖［2］.細胞增殖與細胞周期密切相關，本研究將OP作用于MDAMB231乳腺癌細胞，觀察細胞的增殖和CDK2,CDK4,cyclinD1，cyclinD3表達的改變，探討OP影響MDAMB231乳腺癌細胞增殖的作用機制.
1材料和方法
1.1材料試劑中，OP純度>98%，sigma產品.cyclinD1抗體為兔抗人抗體，使用濃度為1∶75倍稀釋，FITC標記羊抗兔抗體，北京中杉產品.RTPCR試劑盒，上海sangon產品.二甲亞砜(DMSO)，純度>98%，進口分裝試劑，用于配制OP.MDAMB231乳腺癌細胞由中科院上海細胞所提供.實驗前將MDAMB231乳腺癌細胞在無酚紅的DMEM/F12中培養24h以耗盡細胞的內源性雌激素，然后以該培養基進行實驗.實驗分為3組：對照組，給予DMSO；4μmol/LOP組；8μmol/LOP組.
1.2方法
1.2.1MTT試驗以492nm波長測定活細胞的吸光度（A），抑制率（PR）=(對照組A值-實驗組A值)/對照組A值×100%，每次試驗設2個平行孔，試驗重復3次［3］.
1.2.2細胞周期相及凋亡檢測實驗各組細胞處理24,48和72h，收獲細胞，700mL/L冷乙醇固定，RNase消化，碘化丙啶(PI)染色，流式細胞儀檢測，每次試驗設2個平行孔，試驗重復3次.
1.2.3cyclinD1表達分析細胞生長于小蓋玻片上，多聚甲醛固定，血清封閉，加一抗于37℃孵育50min，加熒光素標記二抗孵育20min，甘油封片，LeicaNT激光共聚焦顯微鏡觀察、照相及數據分析，實驗重復2次.計算熒光強度時每組實驗取3張片子，每張片子取36個視野，每個視野取5個細胞，計算其平均熒光強度.
1.2.4RTPCR檢測CDK2,CDK4,cyclinD1,cyclinD3的mRNA表達實驗各組細胞處理24h，收獲細胞，用Trizol試劑一步法提取各組細胞總RNA，逆轉錄為cDNA，置-80℃備用.引物由上海sangon合成，CDK2：F5′GCTCTCACTGGCATTCCTCCT3′，R5′5′CGAAATGAAGGCACTAGAGC3′，產物546bp；CDK4：F5′CTACCTCTCGATATGAGCCAGT3′，R5′CATCTGGTAGCTGTAGATTCTG3′，產物563bp；cyclinD1：F5′GAGGAACAGAAGTGCGAGGA3′，R5′TCTGGAGAGGAAGCGTGTGA3′，產物501bp；cyclinD3：F5′TGTCAGGAGCAGATCGAAGC3′，R5′CCTTTAGAAGGCACTAGAGC3′，產物453bp；βactin：F5′AGGGGCCGGACTCGTCATACT3′，R5′GGCGGCACCACCATGTACCCT3′，產物202bp.25μL體系加樣本總cDNA，上游和下游引物各1.5μL，依次加入試劑盒其他成分.反應條件為94℃滅活40s，60℃或61℃退火40s，72℃延伸40s，22個循環，20g/L瓊脂糖電泳，照相，半定量分析以凝膠成像系統的分析軟件Q1來分析其灰度值，每實驗重復3次，以目的條帶/βactin之比值為結果，各組間進行單因素方差分析.
統計學處理：數據用x±s表示，組間比較用SPSS10.0軟件進行單因素方差分析.
2結果
2.1MDAMB231乳腺癌細胞增殖以4,8μmol/LOP作用MDAMB231乳腺癌細胞48h，細胞抑制率為(17.1±4.1)%，(40.3±8.7)%.
2.2MDAMB231乳腺癌細胞周期相分布8μmol/LOP作用MDAMB231乳腺癌細胞24h和72h，G0/G1期細胞分別為(67.0±17.6)%和(44.4±11.9)%，G0/G1期細胞比對照組［24h，(46.6±12.8)%；72h，(15.3±3.1)%］明顯增高(P<0.05).
2.3MDAMB231乳腺癌細胞中cyclinD1蛋白表達cyclinD1蛋白主要表達于細胞的胞漿中(圖1)，4,8μmol/LOP組cyclinD1表達量熒光值分別為55.1±10.2，41.4±11.2，比對照組(89.9±11.2)明顯降低(P<0.05).
A：對照組；B：4μmol/LOP組；C：μmol/LOP.
圖1OP對MDAMB231乳腺癌細胞中cyclinD1表達的影響SPFITC×400（略）
2.4MDAMB231乳腺癌細胞中CDK2,CDK4,cyclinD1,cyclinD3mRNA表達mRNA的表達以電泳條帶的亮度來判斷，亮度值越強，mRNA量越高，經凝膠成像系統軟件處理，與對照組比較，OP組CDK2,CDK4,cyclinD1及cyclinD3mRNA表達均降低(圖2).
M:marker;1:8μmol/LOP;2:4μmol/LOP;3:對照.aP<0.05vs對照.
圖2OP對MDAMB231乳腺癌細胞中cyclinD3,cyclinD1,CDK2,CDK4mRNA表達的影響（略）
3討論
雌激素是哺乳動物體內分泌的一種性激素，起著調節動物生長、分化和生殖的作用.OP是一種苯環類化合物，能與ERα結合，顯示出雌激素活性.OP主要用于生產非離子表面活性劑、增塑劑、熱穩定劑、光穩定劑等，廣泛存在于生活、工作環境的水體、淤泥、土壤和食物如魚類、貝類及飲用水中［4］.MDAMB231乳腺癌細胞是一株ERα-的細胞，>15μmol/LOP對MCF7乳腺癌細胞會產生毒性作用，1~10μmol/LOP會對MDAMB231乳腺癌細胞產生毒性效應，抑制MDAMB231乳腺癌細胞的增殖［1］.以植物雌激素三羥異黃酮作用184B5/HER細胞，結果發現活細胞數量減少，呈劑量效應關系，同時G0/G1期細胞增高，細胞凋亡也增多.本研究結果顯示4，8μmol/LOP均能抑制MDAMB231乳腺癌細胞增殖，并呈時間效應和劑量效應.
細胞增殖依賴于細胞周期的順利進行，該過程受G1/S，G2/M兩個關健點調控.植物雌激素三羥異黃酮能將MDAMB231乳腺癌細胞阻滯于G2/M期，細胞凋亡增加［5］，超二倍體增加.本研究結果顯示OP作用MDAMB231乳腺癌細胞24h，G0/G1期細胞(凋亡峰)明顯增加(P<0.05)，表明OP具有急性毒性作用，細胞迅速凋亡.OP引起MDAMB231乳腺癌細胞周期阻滯與三羥異黃酮不同，這可能與三羥異黃酮具有多種生物活性有關.
細胞增殖依賴于細胞周期的順利進行，細胞周期的正常進行又依賴于細胞周期調控蛋白如cyclinD，cyclinA，cyclinE等及細胞周期依賴性激酶(CDK)的正常表達.cyclinDCDK4是G0/G1期的限速步驟，過度表達G1期的周期蛋白如cyclinD，cyclinE能加速細胞快速通過G1期.cyclinD1蛋白表達與細胞周期運行有關［6］，抑制腫瘤組織生長與P53的高表達及cyclinD1低表達相關［7］.以17羥雌二醇作用雌性Wistar大鼠60d，發現雌二醇通過減少CDK2，CDK4的表達以及降低CDK2活性，將細胞阻滯于G1/S期［8］.本研究結果表明，OP作用MDAMB231乳腺癌細胞后，能降低CDK2,CDK4,cyclinD1及cyclinD3mRNA的表達，降低cyclinD1蛋白的表達，抑制乳腺癌細胞的增殖，細胞阻滯于G1/S期，導致MDAMB231乳腺癌細胞的增殖受抑，并呈劑量效應和時間效應.
【參考文獻】
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