不同細管凍精對奶牛受胎的影響范文

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《北京農業職業學院學報》2016年第4期

摘要：

為研究探討奶牛細管凍精不同解凍方法對荷斯坦牛受胎效果的影響，試驗對奶牛細管凍精經不同方法解凍后精子活力、有效存活時間以及輸精后第一情期受胎率進行了研究，結果表明：（1）在5℃和15℃解凍時精子活率低于0.35，差異不顯著(P＞0.05)；90℃解凍后活率顯著低于40℃、75℃組(P＜0.05)，其中75℃解凍3s精子的活率最高，解凍效果最好；在40℃解凍20s效果較好。（2）在40℃和75℃解凍后，精子存活時間隨解凍溫度升高而縮短，其中40℃解凍后精子有效存活時間較75℃差異極顯著（P<0.01）。（3）凍精采用75℃3s解凍后輸精較40℃解凍20s第一情期受胎率高5.45%，差異不顯著（P＞0.05）。

關鍵詞：

奶牛精液；解凍溫度；解凍時間；精液品質；受胎率

奶牛冷凍精液質量的好壞，直接影響受胎率，影響著養牛戶的經濟效益。而解凍是冷凍精子復蘇的關鍵步驟，解凍方案的選擇則是冷凍精子復蘇的關鍵點，對精子品質有極大的影響，制約著輸精后的受胎率。針對現在生產實踐中大部分牛場存在牛的人工授精受胎率不高的情況，為篩選出適合目前我國規模化牧場冷凍精液的解凍方案，本研究采用5種解凍方案對冷凍精液進行解凍并觀察其解凍后活率、解凍后有效存活時間和輸精后受胎效果3方面進行研究，以期篩選出適合我國目前冷凍精液的解凍方案。

1材料與方法

1.1冷凍精液與受配母牛的來源

購于北京奶牛中心的荷斯坦奶牛細管型冷凍精液，劑量均為0.25mL，同一批次隨機解凍(20090307)、輸精(11101610)選用。本次試驗的牛為北京某牛場隨機選擇21頭健康無病、發情及排卵都正常的荷斯坦母牛，皆是近年來參加凍精配種的牛群。在母牛自然發情的中、后期只輸一次精，配后40d經直腸檢查判定是否妊娠。

1.2試驗設計

1.2.1解凍方法對奶牛細管凍精解凍后精子活率的影響

在低溫、室溫、體溫及高溫范圍內設計5個水平：5℃、15℃、40℃、75℃、90℃；解凍時間設計15個處理，分別為：5℃(60s、90s、120s)、15℃(20s、40s、60s)、40℃(10s、20s、30s)、75℃(3s、5s、7s)、90℃（1s、3s、5s）。解凍后通過顯微鏡主觀評定精子活率，評定和比較不同處理的解凍效果，每個處理5個重復。

1.2.2解凍方法對奶牛細管凍精解凍后精子存活時間的影響

按照試驗設計采用不同的解凍方法解凍后通過顯微鏡下主觀評定精子活力及存活時間，每個處理5個重復。

1.2.3解凍方法對奶牛第一情期受胎效果的影響

用篩選好的解凍方法解凍精液后，在25±2℃的室溫下鏡檢精子活力，并在30s內完成，然后馬上進行輸精。配種后45d進行直腸檢查，確定是否受孕，并計算其第一情期受胎率。

1.3凍精的評估

通過評定解凍后精子的活率和存活時間來評估凍精的品質。

1.4輸精方法

用篩選好的解凍方法將精液解凍后，在25±2℃室溫下，在30s內鏡檢精子活力，然后馬上輸精。輸精時間選在奶牛接受爬跨后8~14h，或濾泡發育的成熟中期。輸精部位為子宮角分叉處，每頭供試牛l個情期內只輸精1次。且供試牛輸精均由同一輸精員操作，在1個月內完成所有配種工作，配后40d經直腸檢查判定是否妊娠，確定懷孕數。

1.5統計分析

所得的試驗結果用t檢驗和方差分析進行數據處理，確定差異的顯著性（P<0.05）。

2結果與分析

2.1解凍方法對奶牛細管凍精解凍后精子活率的影響

如表1所示，采用不同解凍方法解凍，精子活率差異很大。在5℃和15℃解凍時精子活率差異不顯著(P＞0.05)，而在40℃、75℃和90℃分別解凍不同的時間精子活率呈現出較大差異，90℃解凍后活率顯著低于40℃、75℃組(P＜0.05)，其中在75℃解凍3s活率最高，40℃20s次之，90℃5s最低；而在5℃和15℃解凍精子活率低于0.35，不適合生產使用。

2.2解凍方法對奶牛細管凍精解凍后精子存活時間的影響

根據國標中規定，精子活力指在37℃環境下前進運動精子數占總精子數的百分率?；盥省?5%為合格產品，由表1可見，凍精在5℃和15℃解凍后活率較低，不統計其生存時間。在40℃、75℃和90℃解凍后，精子存活時間隨解凍溫度升高而縮短，其中40℃解凍后精子有效存活時間較75℃差異極顯著（P<0.01）。

2.3解凍方法對奶牛受胎效果的影響

由表2可見，40℃20s解凍組10頭受試牛，成功妊娠4頭，重復發情6頭，第一情期受胎率為40.00%。75℃3s解凍組11頭受試牛，妊娠5頭，重復發情6頭，第一情期受胎率為45.45%。統計分析兩組第一情期受胎率差異不顯著(P＞0.05)。

3討論

目前，為了保證奶牛冷凍精液的受胎率，各種公牛站均嚴格按照牛冷凍精液國家標準進行冷凍精液生產。但生產實踐中仍然存在冷凍精液使用效果欠佳的問題，眾所周知保持凍精解凍后良好活力是人工授精成功的關鍵。而細管凍精的貯存、運輸、取放、解凍等環節都直接影響到凍精解凍活力，其中解凍方法是影響細管凍精解凍后活力的主要因素，嚴重影響奶牛繁殖性能，直接影響到奶牛產犢間隔、產奶性能的發揮，相應也影響養牛戶的經濟效益。關于解凍方法，不同國家和不同學者所持觀點不同。有學者認為，解凍溫度與動物品種及精子膜對冷凍—解凍溫度驟變的敏感性有關，但多數學者傾向于采用35℃～40℃解凍。在精液解凍過程中，造成精子死亡的主要原因是冰晶的形成造成精子物理性損傷和化學性傷害。解凍時要求盡快越過0℃～60℃這段危險溫區，盡量縮短處于危險溫區的時間。只有解凍后活力達到0.35以上，精液才具有受胎能力。在本試驗中，奶牛細管凍精在5℃、15℃和90℃解凍，精子活率均低于0.35，不適合生產實踐使用；75℃解凍3s精子活率最高，40℃解凍20s活率較高，二者差異不顯著（P＞0.05）；其中40℃解凍后精子有效存活時間較75℃差異極顯著（P<0.01）。此外，在本實驗中某牛場隨機選取的21頭健康無病、發情及排卵都正常的荷斯坦母牛，皆是近年來參加凍精配種的牛群。由同一人在12月到1月份進行配種操作，盡可能排除諸如氣候、季節、胎次、輸精技術及輸精時間等因素的影響，試驗結果表明采用75℃3s解凍較40℃20s解凍的第一情期受胎率高5.45%，差異不顯著（P＞0.05）。

4結論

在奶牛生產中，對于因位置、設備等條件限制解凍后不能立即輸精的，建議采用40℃20s解凍；而對于解凍后可立即輸精的采用75℃3s解凍，可獲得較高的第一情期受胎率，進而提高養殖戶經濟效益。

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作者:喬利敏 辛敬濤 付靜濤 肖西山 侯引緒 單位:北京農業職業學院 北京三力源牧業發展有限公司