糖尿病小鼠對旋毛蟲易感性研究范文

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《河南大學學報》2015年第七期

2型糖尿病（Type2diabetesmellitus，T2DM）占糖尿病患者的90％以上。因患病后會造成包括機體免疫力低下在內的各種免疫系統失調體征，也被認為是自身免疫性疾病。旋毛蟲病是旋毛形線蟲引起的人畜共患病。隨著人們生活水平的提高，飲食的多元化，越來越多的人因生食或吃未煮熟含有活的旋毛蟲幼蟲囊包的肉類而感染。鑒于2型糖尿病和旋毛蟲病的流行病學特點，二者合并發病的人群在不斷升高，逐漸受到人們重視。目前，關于2型糖尿病與寄生蟲感染相互關系的研究比較少。本實驗研究胰島素治療前后的2型糖尿病小鼠對旋毛蟲的易感性，為糖尿病患者旋毛蟲感染后的治療提供了實驗依據。

1材料

1．1旋毛蟲蟲種旋毛蟲蟲種引自河南省疾病預防控制中心，用小白鼠傳代保種。實驗前以肌幼蟲轉種小白鼠備用，每鼠經口感染100條肌幼蟲。

1．2試劑與藥品鏈脲佐菌素（STZ）購于Sigma公司，臨用時溶于pH4．5的檸檬酸鈉－檸檬酸緩沖溶液，配成體積分數為2％的溶液（20g／L）；胰島素為人注射用正規胰島素。

2方法

2．1糖尿病小鼠模型的建立及治療40只雄性昆明鼠，高脂高糖飼料飼養4周后，禁食12h，不禁水，從尾靜脈取血一小滴，應用血糖儀檢測空腹血糖并記錄。稱體質量后，小鼠腹腔注射STZ50mg／kg，繼續高脂高糖飼料喂養，1周后再次注射相同劑量STZ。STZ溶于0．1mol／LpH4．5的檸檬酸鹽緩沖液中；對照組給予同量不含STZ的檸檬酸鹽緩沖液。第二次注射STZ1周后，空腹8h尾靜脈取血檢測血糖變化，血糖超過18mmol／L的小鼠視為糖尿病小鼠模型成功。成功的糖尿病小鼠隨機分為糖尿病組和胰島素治療組，并繼續高脂高糖飼料喂養。胰島素治療組按照10U／只，每周2次皮下多點注射，對照組給予相同劑量的生理鹽水。

2．2實驗分組昆明小鼠40只（雄雌各半），體質量（20±2）g，月齡4周，購自鄭州大學實驗動物中心。小鼠適應性飼養1周后被隨機分為正常喂養組10只和高脂高糖喂養組30只。2型糖尿病模型建模成功后小鼠再分為胰島素治療組和未治療組。正常喂養組：用普通飼料喂養此組小鼠，與其他組小鼠同一天口飼含100±5條旋毛蟲幼蟲骨骼肌進行感染。感染28d后，按照實驗動物管理條例提供的方法，斷頸處死。實驗當天8點禁食。高脂高糖喂養組（2型糖尿病模型組）：高脂高糖喂養28d合并腹腔注射小劑量STZ建立2型糖尿病模型，通過血糖檢測鑒定建模成功。口飼含100±5條旋毛蟲幼蟲骨骼肌進行感染。感染28d后，按照實驗動物管理條例提供的方法斷頸處死。實驗當天8點禁食。胰島素治療組：高脂高糖喂養1mon合并腹腔注射小劑量STZ建立2型糖尿病模型，建模成功后，口飼含150±5條旋毛蟲幼蟲骨骼肌進行感染。15d后，用胰島素注射治療（餐前30min注射，每次10U）。治療2周后處死，處死前測小鼠血糖，按照實驗動物管理條例提供的方法，斷頸處死。實驗當天8點禁食。

2．3肌幼蟲檢查小鼠感染后28d處死，解剖小鼠，計數小鼠肌幼蟲的數量。取膈肌壓片鏡檢，收集肌幼蟲并計數。

2．4統計學方法統計分析各組結果，采用SPSS17．0統計分析軟件進行數據處理和統計分析，采用單因素方差分析。

3結果

3．1糖尿病模型小鼠的成模情況造模后48h，模型鼠日攝水量增加，隨著病程進展，明顯出現了多尿、多飲、多食以及身體消瘦的典型“三多一少”癥狀，兼有疲乏、煩渴、毛失去光澤、活動減少和生殖器感染等癥狀。高脂高糖喂養小鼠2周后的體質量與正常喂養組小鼠相比體質量明顯下降。

3．2血糖水平檢測情況高脂高糖組血糖檢測，造模組40d后血糖水平為（17．72±1．4）mmol／L，較造模初始血糖水平（5．95±0．6）mmol／L明顯升高，差異有統計學意義（P＜0．01），說明造模成功。

3．3胰島素治療前后血糖檢測2型糖尿病小鼠建模成功后用胰島素治療2周，血糖明顯下降，與未治療糖尿病小鼠相比，血糖有顯著性差異（P＜0．01）。

3．4旋毛蟲感染后肌幼蟲檢出情況用旋毛蟲幼蟲攻擊各組小鼠后，正常對照組小鼠檢出囊包數量平均為49個，糖尿病模型組檢出囊包數量平均為99個，用胰島素治療后小鼠檢出囊包數量平均為20個，糖尿病模型組和對照組相比有顯著性差異（P＜0．01），胰島素治療組和糖尿病模型組相比有顯著性差異（P＜0．01）。

4討論

糖尿病屬于免疫缺陷疾病，發病率日益增高，已成為世界性的常見病，多發病。糖尿病發病與慢性低度炎癥反應有關，高血糖引起炎癥反應的大量免疫活性細胞增加，在糖尿病病理改變中起到了重要作用。糖尿病分為1型和2型，2型糖尿病又稱成人型糖尿病或者非胰島素依賴型糖尿病，多在35～40歲之后發病，占糖尿病患者90％以上。

旋毛蟲是分布最廣，宿主最多的線蟲，多因生食或吃未煮熟含有活旋毛蟲幼蟲的肉類而感染。近年來，國內許多省市發現本病，甚至有暴發流行的報告。鑒于2型糖尿病和旋毛蟲病的流行病學特點，二者合并發病的人群在不斷升高，二者相互作用的結果成為人們關注的重點。臨床上糖尿病患者常因免疫功能低下而易合并病毒、細菌等病原體的感染，但關于糖尿病與寄生蟲感染關系的研究比較少。我們的實驗用旋毛蟲幼蟲攻擊感染2型糖尿病小鼠，糖尿病小鼠的肌肉幼蟲檢出數較正常對照組小鼠顯著增多（P＜0．01），表明其對旋毛蟲易感性增加。胰島素治療后其對旋毛蟲易感性下降，提示糖尿病小鼠機體免疫力下降，抗旋毛蟲感染的能力下降，經胰島素治療后，較之模型組抗旋毛蟲感染的能力明顯增強。

旋毛蟲病是因旋毛蟲幼蟲和成蟲分泌排泄抗原引起無免疫力宿主產生的變態反應。癥狀輕重與感染程度和宿主的反應強弱有關，機體對旋毛蟲病的抵抗能力主要是免疫系統。有報道表明，2型糖尿病小鼠CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋比值、NK細胞顯著降低，尤以輔助性CD4＋細胞下降突出。因此，2型糖尿病小鼠免疫能力下降可能是導致對旋毛蟲易感的重要因素之一。

已有報道顯示，旋毛蟲感染后STZ誘導T1DM（1型糖尿病）小鼠的胰島病理變化與單純STZ誘導T1DM小鼠的相似，在感染急性期T1DM小鼠的血糖水平顯著降低，在慢性期血糖無顯著變化，即旋毛蟲感染不能阻止STZ誘導小鼠發生T1DM。臨床研究發現，旋毛蟲感染可加劇糖尿病進展［6］，但2型糖尿病對于旋毛蟲的易感性及對旋毛蟲病治療藥物的敏感性研究未見報道。我們的實驗探索了2型糖尿病與旋毛蟲的聯系，為治療2型糖尿病合并旋毛蟲感染提供了很好的實驗依據。

作者：劉璋楠 魏志潘 劉宇軒 夏新澤 周欣宇 王國英 王耀輝 單位：河南大學 醫學院 河南大學醫學院 細胞與分子免疫學實驗室