氣相色譜法測(cè)定甜蜜素的研究范文

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1試驗(yàn)方法

1.1氣相色譜條件色譜柱：HP-5毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm×0.25μm）；固定液：（5%苯基）-甲基聚硅氧烷；程序升溫：柱溫80℃保持3min，升溫速率6℃/min，終止溫度150℃保持3min；氣化室溫度：150℃；檢測(cè)器溫度：150℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比5:1；柱流速：1.5mL/min，氫氣：30mL/min；空氣：300mL/min。

1.2質(zhì)譜條件傳輸線(xiàn)：250℃，電子電離源溫度：200℃，溶劑延遲時(shí)間：3min；掃描范圍：50~600，全掃描。

1.3甜蜜素衍生物定性試驗(yàn)采用氣相色譜和質(zhì)譜2種方法定性，相互確證了甜蜜素衍生物中的目標(biāo)峰和干擾峰。氣相色譜定性采用對(duì)本底檢測(cè)和本底加標(biāo)檢測(cè)，然后對(duì)比目標(biāo)峰和干擾峰的保留時(shí)間以及峰面積的變化達(dá)到定性目的。質(zhì)譜法定性采用ThermoPolarisQ氣質(zhì)聯(lián)用儀離子全掃描方法定性，通過(guò)NIST（2005）譜庫(kù)對(duì)質(zhì)譜圖進(jìn)行自動(dòng)檢索。

1.4繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)甜蜜素標(biāo)樣處理完后，立即將標(biāo)準(zhǔn)提取液進(jìn)樣1μL~5μL于氣相色譜儀中，即甜蜜素含量分別為1μg、2μg、3μg、4μg、5μg，根據(jù)響應(yīng)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.5進(jìn)樣時(shí)間對(duì)回收率的影響對(duì)質(zhì)量濃度為1mg/L標(biāo)樣進(jìn)行分析，每隔8h進(jìn)樣1次，計(jì)算回收率，繪制環(huán)己醇亞硝酸酯回收率隨時(shí)間變化趨勢(shì)圖。

2結(jié)果與分析

2.1甜蜜素衍生物定性甜蜜素在硫酸介質(zhì)中、低溫狀態(tài)下與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成環(huán)己醇，環(huán)己醇在酸性條件下又繼續(xù)與亞硝酸鈉反應(yīng)生成環(huán)己醇亞硝酸酯。因此，我們推斷甜蜜素衍生物的干擾物可能為環(huán)己醇，目標(biāo)物環(huán)己醇亞硝酸酯不穩(wěn)定，會(huì)隨著時(shí)間的推移慢慢轉(zhuǎn)化成環(huán)己醇，造成甜蜜素檢測(cè)結(jié)果的不穩(wěn)定和重復(fù)性較差等問(wèn)題。為了確定干擾物的成分，我們首先將環(huán)己醇標(biāo)樣加入之前的正己烷提取物中，發(fā)現(xiàn)干擾物峰面積明顯增加，出峰時(shí)間保持一致。正己烷提取物中加入環(huán)己醇前后對(duì)照見(jiàn)圖1。然后用氣質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)干擾物定性，NIST（2005）譜庫(kù)自動(dòng)檢索結(jié)果顯示，SI值為912，RSI值為933，與環(huán)己醇匹配率為83%。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制從色譜圖（圖1）上可以看出，甜蜜素衍生產(chǎn)物呈2個(gè)色譜峰，分別為目標(biāo)峰和干擾峰，目標(biāo)峰即環(huán)己醇亞硝酸酯。標(biāo)樣處理完成后，將正己烷提取產(chǎn)物立即用氣相色譜儀分析，以目標(biāo)峰峰面積計(jì)算，做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)在1mg/L~5mg/L范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9983，如圖2，且回收率在90%以上。

2.3環(huán)己醇亞硝酸酯回收率隨時(shí)間的變化趨勢(shì)為了研究時(shí)間的變化和甜蜜素2個(gè)衍生產(chǎn)物之間轉(zhuǎn)化的規(guī)律，每隔8h分析一次標(biāo)樣，濃度為1mg/L，通過(guò)目標(biāo)峰的峰面積計(jì)算環(huán)己醇亞硝酸酯的回收率。環(huán)已醇亞硝酸酯回收率隨時(shí)間的變化趨勢(shì)見(jiàn)圖3。結(jié)果顯示，隨著時(shí)間的推移，目標(biāo)峰逐漸變小，干擾峰逐漸變大，環(huán)己醇亞硝酸酯的回收率越來(lái)越低。通過(guò)圖3繪制的曲線(xiàn)可以看出，在最初的24h之內(nèi)，目標(biāo)物回收率相對(duì)穩(wěn)定，在85%~95%之間，受干擾物的影響較小；到了24h之后，目標(biāo)物就會(huì)逐漸轉(zhuǎn)化成干擾物，回收率明顯減少；到了72h，回收率基本為零。因此，檢測(cè)食品中甜蜜素含量時(shí)，應(yīng)該在樣品處理完24h內(nèi)完成檢測(cè)，才能保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3結(jié)論

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中規(guī)定的甜蜜素的檢測(cè)方法為，在硫酸介質(zhì)中甜蜜素與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，通過(guò)環(huán)己醇亞硝酸酯的色譜峰對(duì)甜蜜素進(jìn)行定性和定量，標(biāo)準(zhǔn)中并未提出檢測(cè)時(shí)間的問(wèn)題。但實(shí)際工作中，我們發(fā)現(xiàn)甜蜜素衍生產(chǎn)物在色譜圖上呈現(xiàn)2個(gè)色譜峰，除了環(huán)己醇亞硝酸酯外還有一個(gè)干擾峰，而且環(huán)己醇亞硝酸酯會(huì)隨著時(shí)間的變化逐漸減少，影響了檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。本文通過(guò)研究，首先定性了甜蜜素衍生物的2個(gè)色譜峰，即目標(biāo)峰為環(huán)己醇亞硝酸酯，干擾峰為環(huán)己醇，生成的環(huán)己醇亞硝酸酯會(huì)逐漸轉(zhuǎn)化成環(huán)己醇。其次通過(guò)對(duì)不同時(shí)間段的目標(biāo)產(chǎn)物回收率進(jìn)行分析，表明樣品處理完之后應(yīng)在24h之內(nèi)上機(jī)檢測(cè)，才能確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。因此本文對(duì)國(guó)標(biāo)中甜蜜素檢驗(yàn)方法的完善和發(fā)展具有一定意義，為今后甜蜜素檢驗(yàn)的創(chuàng)新奠定基礎(chǔ)。

作者：趙小珍龐小剛張洪單位：山西省分析科學(xué)研究院