酶聯免疫實驗對食品分析的重要性范文

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1實施過程及具體實驗步驟

根據筆者的教學經驗，該綜合性實驗約需教學時數，10～12學時，具體操作過程如下。

(1)帶教老師講述ELISA的原理，應用及注意事項。

(2)通過觀看酶聯免疫吸附實驗操作視頻，了解整個實驗流程及操作要點。

(3)將學生分組，每組3人，開展ELISA綜合實驗。

(4)實驗操作結束，帶教老師與學生共同討論分析實驗結果。

具體的實驗操作步驟如下：以測定牛奶和魚肉中的氯霉素為例，采用酶標抗原的直接競爭法，介紹本實驗具體實驗步驟。

(1)包板：將抗體用包被液稀釋一定的倍數，加入96孔酶標板中，100μL/孔。37℃孵育，過夜。

(2)封板：洗板兩次，加入封閉液120μL/孔，37℃孵育，3小時。

(3)樣品前處理：封板時，分別對樣品牛奶和雞肉進行前處理。

(4)烘干：將封閉好的板倒掉封閉液，37℃烘干。

(5)加樣：加標準品/樣本50μL/孔，然后加入酶標記物50μL/孔，再振蕩混勻，用封板膜蓋板，37℃條件下反應30min。

(6)顯色：洗板4～5次，每次浸泡30s，拍干。每孔加入底物緩沖液50μL，再加底物液50μL，輕輕振蕩混勻，37℃或室溫環境避光顯色10min。

(7)測定：每孔加入終止液50μL，輕輕振蕩勻，設定酶標儀于450nm處測定吸光度值。

(8)結果判定：以標準品百分吸光率為縱坐標，以氯霉素標準品濃度（ng/mL）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氯霉素實際濃度。

2結語

ELISA實驗是一個綜合性實驗，涉及到有機化學，食品化學，生物化學以及免疫學等方面的相關知識。因此，學生通過本實驗，可以取得以下效果：（1）鞏固理論識，加強對相關知識的理解，并對該技術在食品安全檢測領域的重要性有一定的認識。（2）結合視頻及具體實驗操作，了解整個實驗的操作流程。（3）學生之間分組進行實驗，加強相互協作及團隊意識。在食品科學與工程、食品營養、食品質量與安全、生物工程等專業的食品分析實驗課中，我們為部分同學開設了ELISA綜合實驗，檢測過的對象包括氯霉素、鹽酸克倫特羅、三聚氰胺、和孔雀石綠等。本實驗內容豐富充實，實驗現象生動有趣，深受學生的歡迎。

作者：沈玉棟李瑞婷單位：華南農業大學食品學院