木霉有效抗黃瓜枯萎相關實驗范文

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摘要木霉是一種重要的生防菌,對黃瓜枯萎病菌有很強的拮抗作用,主要作用方式有:競爭、重寄生、抗生、溶菌作用。溫室盆栽試驗顯示,木霉可顯著防治黃瓜枯萎病菌。

關鍵詞木霉;黃瓜枯萎病菌;生防

木霉(Trichodermaspp.)屬真菌界、雙核菌門、半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科、真菌屬,是迄今為止研究和應用最多的一類生防菌[1]。木霉的生防機制復雜,主要包括競爭、重寄生、抗生、溶菌等[2]。研究木霉對病原菌的作用機制及防治效果,可以優選木霉菌株,從而提高生防效率。

1材料與方法

1.1試驗材料

以病株上分離的黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)為拮抗對象,土壤中分離的木霉菌株為拮抗菌。

1.2試驗方法

1.2.1競爭作用。采用對峙培養法[3],在直徑為9cm的PDA平板一側接種直徑為5mm的病原真菌菌絲塊,在平板另一側接種拮抗菌,28℃共培養,觀察兩菌的生長情況。

1.2.2重寄生作用。在PDA培養基中央放置1塊20mm×20mm無菌蓋玻片,在左側距蓋玻片40mm處接種木霉,右側距蓋玻片20mm處接種黃瓜枯萎病菌,28℃恒溫培養。取下蓋玻片,于顯微鏡下觀察菌絲體的作用方式。

1.2.3抗生作用。在裝有100mLPDB的三角瓶中接入直徑5mm的木霉菌塊,28℃、150rpm培養6d,取濾液離心后過0.22μm細菌濾器。在90mL、45℃的PDA中加入10mL上述濾液,搖勻倒成平板,接種直徑為5mm的黃瓜枯萎病菌菌塊。28℃恒溫培養,觀察生長情況。

1.2.4溶菌作用。將培養4d的木霉發酵液8000rpm離心10min。取15mL上清液倒入培養皿中,接入黃瓜枯萎病菌菌塊。淺層培養5d后觀察生長情況。以高溫滅菌的木霉上清液中培養的病菌菌塊為對照。

1.2.5盆栽試驗。將黃瓜種子經70%乙醇消毒1min,2%NaClO消毒5min,55℃溫水浸15~20min,25℃浸泡2~3h,無菌水沖洗3次,25~30℃下催芽1~2d。將黃瓜枯萎病菌接種到麩皮∶玉米粉為3∶1的培養基中,28℃恒溫箱中培養至長滿整個三角瓶。將催芽基本一致的黃瓜苗在木霉菌懸液(約1×108cfu/mL)中浸1h,取出于滅菌濾紙片上干燥1h后,播種于拌有黃瓜枯萎病菌制劑的土壤中。以無菌水浸種處理為對照。2結果與分析中國論文聯盟編輯。

2.1競爭作用

平皿對峙試驗顯示,木霉生長迅速,可快速占據空間,有很強的生長競爭優勢,能有效抑制黃瓜枯萎病菌的生長。

2.2重寄生作用

顯微鏡下觀察到木霉菌絲體纏繞著黃瓜枯萎菌絲生長,并在病菌菌絲上產生大量分枝,產生寄生作用。

2.3抗生作用

在PDA培養基中加入10%的木霉發酵液后,黃瓜枯萎病菌菌絲生長不旺盛,與對照有顯著的差異。

2.4溶菌作用

在未滅菌的木霉上清液中培養的黃瓜枯萎菌塊,僅有細小菌絲的生長,數量較少;而在滅菌后的上清液中,黃瓜枯萎菌生長旺盛,形成大塊菌絲團。

2.5盆栽防效試驗

盆栽試驗結果表明,與對照相比,木霉浸種處理的黃瓜幼苗死亡率為25.0%,顯著低于對照的66.7%。

3結論與討論

作為安全而環境友好的生防因子,木霉在田間的施用可有效地防治作物病害,從而避免大量使用農藥導致病原菌抗藥性的產生、作物農藥含量超標及環境污染等問題[4-6]。因此,對木霉生防機制深入而全面的研究,將對綠色農業的可持續發展產生重要的推動作用。

4參考文獻

[1]辛雅芬,商金杰,高克詳.拮抗木霉菌的生防機制研究進展[J].東北林業大學學報,2005,33(4):88-91.

[2]HARMANG,HOWELLCR,VITERBOA,etal.Trichodermaspecies-opportunistic,avirulentplantsymbionts[J].Nature,2004(2):43-56.

[3]蒲金基,曾會才.綠色木霉LTR12-1對黃瓜枯萎病菌防治作用機制的初步研究[J].熱帶農業科學,2002,22(4):22-25.

[4]呂天曉,徐鳳花,李世貴,等.生防木霉菌原生質體的制備及再生研究[J].生物技術通報,2009(4):130-134.

[5]莊敬華,陳捷,楊長成,等.生防木霉菌生物安全性評價[J].中國農業科學,2006,39(4):715-720.

[6]王勇,王萬立,劉春艷,等.生防木霉菌Tr9701的鑒定及其生物學特性[J].華北農學報,2006,21(1):100-104.