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姜為姜科多年生草本植物,根莖肉質(zhì),具芳香和辛辣氣味。姜不僅是一種常用的蔬菜及調(diào)味品,還是一種常用的中藥材,有發(fā)表、出汗、消痰、止嘔、散風(fēng)、祛寒、止泄、疏肝、導(dǎo)滯、解毒等功效[1]。近年研究表明,姜還具有抗腫瘤、抗氧化作用[2]。姜在生產(chǎn)上長期采用無性繁殖,易感染多種病毒,致使產(chǎn)量和品質(zhì)降低,嚴(yán)重影響姜的生產(chǎn)和經(jīng)濟(jì)效益的提高。本試驗(yàn)通過組織培養(yǎng)技術(shù),對姜進(jìn)行脫病毒和復(fù)壯,探索了工廠化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)姜種源、種苗的可能性。
1材料
姜(ZingiberoffcindelRoscoe)的莖尖、幼芽。
2培養(yǎng)條件
基本培養(yǎng)基為MS。
誘導(dǎo)愈傷組織和芽培養(yǎng)基:①M(fèi)S+NAA0.03mg/L+IAA0.03mg/L+KT0.2mg/L。
芽苗增殖培養(yǎng)基:②MS+NAA0.03mg/L+IAA0.03mg/L+KT0.2mg/L+6-BA0.05mg/L+2,4-D0.025mg/L;③MS+NAA0.03mg/L+IAA0.03mg/L+KT0.2mg/L+6-BA0.2mg/L;④MS+NAA0.03mg/L+IAA0.03mg/L+KT0.5mg/L。
生根培養(yǎng)液:⑤為自來水或干凈河水(均不用滅菌處理)。
上述培養(yǎng)基均加入0.8%~0.9%瓊脂、3%蔗糖,pH值為5.8~6.0。培養(yǎng)溫度23±2℃,光照時(shí)間14~15h/d,光強(qiáng)30μmol/m2·s。生根培養(yǎng)也可以室內(nèi)自然溫度、自然光照下培養(yǎng)。
3生長與分化情況
3.1無菌材料的獲得
2008年3月上旬從農(nóng)戶發(fā)酵廄肥堆中取出經(jīng)高溫發(fā)酵熱處理(可殺滅部分姜病毒)催芽的姜塊,掰取生有健壯芽的姜塊,自來水充分沖洗干凈,去泥砂,小心剝?nèi)パ客鈱尤~鞘,在無菌超凈工作臺上,將姜塊表面、芽周圍用75%酒精棉球擦拭2遍,1%有效氯的次氯酸鈉溶液浸泡滅菌30min,0.1%HgCl2浸泡滅菌10min,無菌水洗滌5~6次,無菌吸水紙吸干芽塊表面水分,再次剝?nèi)ネ鈱友壳剩腥?.5~1.0cm長的莖尖或幼芽,作為外植體。
3.2愈傷組織和芽的誘導(dǎo)
將外植體接種到培養(yǎng)基①上,30d后可見到白色、綠色愈傷組織及小芽,50d后見到多個(gè)胚狀體及芽苗,芽苗高3~5cm,培養(yǎng)80d后芽苗高可達(dá)9.0cm。
3.3叢生芽的增殖
將上述芽苗從基部切取或分離(掰取),高于3cm的芽苗均截去上部葉及葉鞘,然后將芽苗接種到叢生芽增殖培養(yǎng)基②~④上,培養(yǎng)40d,可見到叢生的胚狀體及芽苗。培養(yǎng)70~80d,形成多叢胚狀體及芽苗3~7株,芽苗高3~9cm。這時(shí),胚狀體可一叢一叢地切取或分離,芽苗也可一株一株的切取或分離,繁殖系數(shù)為5~12。
增殖培養(yǎng)基②~④作用效果相差不大,只是培養(yǎng)基②芽苗葉色較綠,培養(yǎng)基④形成的胚狀體及芽苗數(shù)稍多。
3.4生根與移栽
將5~9cm高的芽苗從基部分離或切取,轉(zhuǎn)入盛生根培養(yǎng)液⑤的器皿中并固定,然后將器皿口用透明塑料膜或玻璃板蓋上封閉,防芽苗因水分蒸發(fā)而萎蔫,每10~15d換液1次。培養(yǎng)20d后長出白色根突,30d后長出2~3條1~2cm白色幼根,這時(shí)可將塑料膜或玻璃板去掉,敞開器皿培養(yǎng)生根。培養(yǎng)40~50d后長出3~6條根,根長3~7cm,并明顯見到密集白色根毛,生根率達(dá)99.5%以上。這時(shí)將生根苗取出直接移植于大棚的土壤中,成活率達(dá)99%以上。該生根方法的優(yōu)點(diǎn):①芽苗不污染,也無需無菌條件,克服了用瓊脂等固體培養(yǎng)基生根易污染爛苗的難題;②方法簡單,取材方便,成本低。
4結(jié)論
試驗(yàn)結(jié)果表明,通過組織培養(yǎng)與快速繁殖,對姜進(jìn)行脫毒和復(fù)壯,可以克服無性繁殖易使姜感染病毒、致使產(chǎn)量和品質(zhì)降低的缺點(diǎn),為工廠化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)姜種源、種苗提供了一條有效途徑。
姜芽苗增殖至5~9cm高生根,芽苗不污染,無需無菌條件,可直接于自來水或干凈河水(不用滅菌處理)的生根培養(yǎng)液中生根,方法簡單,取材方便,成本低,且克服了用瓊脂等固體培養(yǎng)基生根易污染爛苗的難題,移栽成活率達(dá)99%以上。