四逆散對水環境的影響范文

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1模型制備

水環境小平臺站立法模型大鼠的復制，采用D．Suchecki多平臺法(modifiedmultipleplatformmethod，MMPM)進行改良制作［4］，其將大鼠置于睡眠剝奪平臺，進行連續部分睡眠剝奪14d，具體方法如下:①適應性飼養，購進動物先進行3d適應性飼養，在中醫診斷動物研究實驗室進行。40W日光燈照射(8∶00－20∶00)，室內溫度控制在22．0～24．0℃，保持安靜，大鼠第籠5只。常規鼠類飼料喂養。②一般訓練，實驗前3d，讓大鼠適應水槽環境，即每天18∶00將小鼠置于平臺，訓練平臺站立，水面距平臺面約1.0cm，水溫保持在20～22℃，每個水槽中隨機分配一組大鼠(10只)，適應2h后放回鼠籠。每天訓練60min，訓練3。第3天結束時，剔除不適于游泳運動的大鼠。③水環境小平臺站立，從第4天開始，進行部分睡眠剝奪(18∶00－9∶00)，9∶00以后將其從平臺取下放入鼠籠進行飼養，連續處理14d。環境持續光照，水槽中水每日更換，保持水溫為22℃左右。

1．1模型制作方法剝奪箱(110cm×60cm×40cm)中放置15個平臺(直徑6．5cm，高8．0cm)，在平臺周邊注滿水，水溫保持在22℃左右，水面低于平臺表面1．0cm。將10只大鼠放置平臺上，大鼠在平臺上可自行飲食飲水，并可在平臺間活動。當大鼠進入異相睡眠時，由于全身肌肉張力降低，節律性地垂頭觸水或落入水中覺醒，從而使動物始終不能進入異相睡眠。

1．2給藥方案自造模第1天始，每天于睡眠剝奪后9∶00，四逆散高劑量組、中劑量、低劑量組，陽性對照藥均按人體用藥量換算成大鼠等效劑量統一作為用藥量，藥物濃度按10mL•kg－1灌胃容量用蒸餾水配制，約為每250g體質量2mL，根據大鼠體質量調整用藥量，連續給藥14d。空白對照組、模型組均灌服等體積蒸餾水。

2檢測指標及方法

2．1曠場實驗木質曠場箱(100cm×100cm×40cm)為立方形，由北京中醫藥大學神經免疫實驗室提供。內側壁及底面為灰色，用黑線劃分為25格，每格形制均為20cm×20cm。沿側壁的格稱為外周格(16個周邊正方形)，其余為中央格(9個中心正方形)。正中格正上方安置攝像頭。剝奪14d時，于安靜、遮光條件下進行曠場實驗。實驗前先置大鼠于測試實驗室內適應10min。操作者握住大鼠尾根部1/3處，輕輕將大鼠放入曠場箱的正中格內，開始同步錄像、計時。觀察5min內大鼠活動情況。取出大鼠后，用毛巾蘸清水及低濃度乙醇徹底擦拭箱底及箱壁，并等待其揮發擴散，避免留有氣味而干擾下一只大鼠的觀察結果。

2．2檢測指標①穿格次數(次);②站立次數(次);③修飾次數(次)。

3統計學方法

采用SPSS20．0軟件進行統計學處理，計量資料采用均數±標準差(x珋±s)描述，正態分布的資料采用單因素方差分析，偏態分布的資料采用秩和檢驗檢驗。P＜0．05為差異有統計學意義。

4結果

各組大鼠曠場垂直活動、水平活動見表1，表2。

5討論

本研究從中醫發病機制出發，旨在從這一特殊角度揭示和發展“中醫病因病機學”與“中醫環境學”，并深入探究水環境小平臺站立法大鼠模型的“勞倦”特性。大鼠在新環境中情緒變化要經歷緊張、興奮、探索、適應4個步驟。因此，大鼠興奮程度常以跨格次數來反應。大鼠在興奮狀態下多表現為活動頻繁，并留下自身的生物氣息。現代研究認為，曠場實驗中動物總運動距離和總穿格數、央區域運動距離與中央區域停留時間都具有良好相關性，重復性好，也證明了他們間的對應關系。然而大鼠總運動距離等新指標應能更直接地反應動物的興奮程度，防止人為對實驗動物造成的“二次應激”。根據研究結果分析發現，①模型組行為學指標均高于正常組，環境對照組略高于正常組且與模型組有差異，提示本研究的造模方法已達到理想的水平，符合造模要求;②陽性對照組各數值趨近并略高于正常組，由于行為學檢測的誤差，尚可提示對照組為有效性對照;③四逆散高劑量、中劑量、低劑量組數值均低于模型組，而趨近于正常組，提示水環境小平臺站立法大鼠模型存在著心理情緒的異常改變［7］。水環境小平臺站立法模型大鼠情緒變化較為顯著，與中醫“倦”的概念相吻合。同時，模型大鼠也出現進食量減少，體質量減輕，神情倦怠脾虛證癥狀，證明了“勞倦傷脾”理論［8］。《素問•本病論》曰:“人飲食勞倦即傷脾。”現代學者認為，狹義勞倦不包括飲食失宜，僅指過勞(勞力、勞神、房勞)，作為病因常以“飲食勞倦”形式出現［9］。所以，本研究從中醫學“肝主疏泄”出發，立足于“改善神經心理異常”環節，完善心理情緒異常的治療理念與方案，利用“疏肝理脾”代表方劑四逆散。四逆散出自《傷寒論》，由柴胡、白芍、枳實、甘草四味藥組成，是疏肝解郁，調和肝脾的基礎方。原方組成為柴胡、枳實、芍藥、炙草各等分。《神農本草經》記載:柴胡主心腹腸，胃中結氣，飲食停驟，寒熱邪氣，推陳致新;枳實除寒熱結，止利等;芍藥主邪氣，腹痛，除血痹，破堅積，止痛，利小便;甘草主五臟六腑寒熱邪氣。方中柴胡，疏泄肝氣。甘草，養肝健脾，有利于柴胡升散肝氣之運化。枳實，降氣、行氣，與柴胡配伍一升一降，共調肝脾之氣機。芍藥，可入血分，枳芍配伍可助血行，血行可載陽氣達四末。四者相合，共奏疏肝理脾、調和氣血之功。

作者：馬捷 劉晶 劉燕 李峰 宋月晗 韓晨霞 郭思媛 楊茜 單位：北京中醫藥大學