氟康唑立方液晶凝膠的評價范文

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《軍事醫學雜志》2015年第十二期

［摘要］

目的對氟康唑立方液晶凝膠進行表征，建立氟康唑含量測定方法。方法以甘油單油酸酯(GMO)為液晶材料制備氟康唑立方液晶凝膠，偏光顯微鏡及小角X衍射儀(SAXS)對氟康唑立方液晶凝膠進行表征;采用高效液相色譜法測定立方液晶凝膠中氟康唑的含量。結果立方液晶凝膠在偏光顯微鏡(PLM)下為暗視野;SAXS顯示空白立方液晶凝膠中出現2個信號峰，分別是q1(0．83209nm－1)和q2(1．017nm－1);氟康唑立方液晶凝膠中出現2個信號峰，分別是q1(0．81888nm－1)和q2(0．95095nm－1)。高效液相色譜法測定立方液晶凝膠中氟康唑在20～500μg/ml范圍內線性關系良好。結論PLM及SAXS適宜于立方液晶凝膠表征，高效液相測定方法可用于氟康唑立方液晶凝膠的質量控制和評價。

［關鍵詞］

氟康唑;立方液晶凝膠;顯微鏡檢查，偏振;小角X衍射儀;色譜法，高效液相

氟康唑(fluconazole，FLZ)分子式為C13H12F2N6O，具有三唑環類的化合物，純品為白色或類白色結晶或結晶性粉末，在甲醇中易溶，在乙醇中溶解，在二氯甲烷、水或醋酸中微溶，在乙醚中不溶。其分子結構如圖1所示。目前由于氟康唑的疏水性［1］限制了其在外用經皮給藥制劑的應用，而立方液晶凝膠作為一種新劑型，具有獨特的內部雙水道結構，構成了三維延伸的雙連續的類似“蜂窩狀”結構，能同時增溶親水、親脂及兩親性分子［2］，此外，它還可包載大量的藥物，特別是疏水性藥物［3］，因此考慮將其作為氟康唑一種理想的載藥體系。本研究嘗試以甘油單油酸酯(GMO)為液晶材料，對制備的氟康唑立方液晶凝膠進行表征，并建立HPLC方法測定立方液晶凝膠中氟康唑的含量。

1儀器與試藥

LC-10ATVP高效液相色譜儀，包括SPD-10AVP型紫外檢測器(日本島津公司);梅特勒－托利多AB-104電子天平(瑞士);恒佳牌DT-1000E電子天平(常熟市佳衡天平儀器有限公司);TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);QL-901渦旋儀(海門市其林貝爾儀器制造有限公司);KQ5200超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);HH-4數顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司);LEICADM2500P偏光顯微鏡(PLM，北京同舟同德儀器儀表有限公司);SAXSess小角X衍射儀(SAXS，奧地利AntonPaar公司)。氟康唑原料藥(浙江金伯士藥業有限公司，純度98．96%，批號140601);氟康唑對照品(中國食品藥品檢定研究院，含量:99．8%，批號100314-201204);GMO(丹麥丹尼斯克公司惠贈，純度≥90%，批號116703);甲醇(色譜純，安徽時聯特種溶劑股份有限公司，批號6508FU01)，無水乙醇(國藥集團化學試劑有限公司，批號20140910)。水為純化水，其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2．1氟康唑立方液晶凝膠的制備稱取適量氟康唑原料藥加入一定量融化后的GMO中，放置后渦旋加入純化水，然后水浴放置1h，最后于常溫放置1周后即得。立方液晶凝膠中氟康唑的最終質量分數為10．0mg/g。制備的氟康唑立方液晶凝膠最終呈無色、透明凝膠狀。

2．2氟康唑立方液晶凝膠的表征

2．2．1偏光顯微鏡取少許樣品均勻涂布于載玻片上，蓋上蓋玻片，置于PLM下觀察，可發現其在PLM下無偏光，視野為暗黑色，這與立方液晶分子排列為各向光學同性相符［4］。

2．2．2小角X衍射儀(SAXS)將氟康唑立方液晶凝膠取適量放置于直徑1mm的石英毛細管中，用環氧樹脂密封，進行小角X散射［X射線源為Cu-Kα輻射(0．1542mn)，管壓和管流分別為50kV和40mA］，樣品的照射時間為15min，背景散射對樣品的影響已扣除。散射根據公式S=2sinθ/λ=q/2π，其中S為散射矢量，q為散射因子，θ為散射角，將散射強度對散射因子作圖即得到SAXS圖譜(圖3)。由圖3A可見，空白立方液晶凝膠中出現2個散射峰，散射因子分別為q1(0．83209nm－1)和q2(1．017nm－1)，散射因子的比值為q1∶q2槡槡=2∶3，屬于典型的立方液晶SAXS峰特征，其內部結構對應的為雙菱形晶格(Pn3m)結構［5，6］;根據圖3B可知，氟康唑立方液晶凝膠中出現2個散射峰，散射因子分別為q1(0．81888nm－1)和q2(0．95095nm－1)，散射因子的比值為q1∶q2槡槡=6∶8，這也是典型的立方液晶SAXS峰特征，其內部結構對應的為螺旋型晶格(Ia3d)結構［7，8］。因此可以看出，隨著藥物氟康唑的加入，氟康唑參與立方液晶內部結構的形成，使得立方液晶內部晶型從Pn3m變成了Ia3d結構。

2．3氟康唑立方液晶凝膠的含量測定方法

2．3．1色譜條件和系統適用性實驗WondasilC18-WR色譜柱(4．6mm×250mm，5μm);流動相:甲醇－磷酸鹽緩沖液(pH7．0)(45∶55);流速:1．0ml/min;檢測波長:261nm;進樣量:10μl。在此色譜條件下，理論塔板數應不低于3000。

2．3．2溶液的配制

2．3．2．1對照品溶液精密稱取氟康唑對照品10．00mg，置于10ml容量瓶中，加入甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成1．0mg/ml溶液作為對照品儲備液;精密吸取該儲備液1．0ml置10ml容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻后作為對照品溶液。

2．3．2．2供試品溶液精密稱取氟康唑立方液晶凝膠0．10g(本品為1%氟康唑立方液晶凝膠)，加入5ml甲醇，超聲10min，溶解，并用甲醇定容至10ml容量瓶中，用0．22μm微孔濾膜過濾后即得供試品溶液。

2．3．2．3陰性對照溶液稱取空白立方液晶凝膠0．10g，精密稱定，按2．3．2．1制備陰性對照品溶液。

2．3．3專屬性實驗精密量取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由圖4可見，輔料GMO不干擾氟康唑的含量測定，說明方法專屬性良好。

2．3．4線性關系的考察精密量取氟康唑對照品儲備液5．0ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，得500μg/ml溶液。將上述溶液用甲醇稀釋成濃度分別為20、80、100、200、500μg/ml的系列標準溶液。分別精密量取10μl進樣，記錄色譜圖。以氟康唑的濃度C(μg/ml)對峰面積A作標準曲線，線性回歸方程為:A=585．34C+206．54，相關系數r=0．9999。結果表明，氟康唑在20～500μg/ml濃度范圍內線性關系良好。

2．3．5精密度實驗精密量取2．3．2．1項下氟康唑對照品溶液10μl，按2．3．1項下色譜條件，連續進樣6次。分別測定峰面積，RSD為0．92%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2．3．6重復性實驗取同一批氟康唑立方液晶凝膠(批號:20150417)6份，按2．3．2項下分別制備6份樣品溶液，分別進樣10μl，按含量測定項下相同色譜條件下測定并計算含量。平均含量為99．65μg/ml，RSD為1．55%(n=6)，表明方法重復性良好。

2．3．7穩定性實驗取一份氟康唑立方液晶凝膠(批號:20150417)，按2．3．2．2項下制備樣品溶液，分別于0、2、4、8、12和24h進樣10μl，記錄色譜圖。測得供試品溶液峰面積RSD為1．83%，表明供試品溶液放置室溫24h內穩定。

2．3．8加樣回收率實驗分別精密稱取9份已知含量的同一批立方液晶凝膠(批號:20150417)各約0．1g，同時精密量取2．3．2．1項下氟康唑對照品溶液各0．8、1．0、1．2ml，置10ml容量瓶中(平行樣品3份)，按2．3．2．2項下方法制備溶液，按“2．3．1”項下色譜條件測定氟康唑含量，回收率結果見表1。

2．3．9樣品的含量測定取3批不同批號的樣品，按2．3．2．2項下方法制備樣品溶液，按2．3．1項下色譜條件分別進樣10μl測定，結果見表2。

3討論

立方液晶凝膠中的基質GMO為高分子聚合物，不溶于水相，本制劑用流動相稀釋以后變成半透明狀膠體混懸液，采用高速離心和0．22μm濾膜過濾均過濾不掉膠體基質?？紤]到樣品可能會造成色譜柱堵塞，甚至損壞儀器，在進高效液相分析前必須完全溶解樣品中的GMO。本實驗采用甲醇溶解樣品，即可得到無色透明的溶液，該法很好地避免了大分子基質對色譜柱的影響。立方液晶的獨特結構使其在醫藥領域的應用具有很多優點，除了可持續釋放內部包載的藥物，它還可提供優良的生物相容性和完整的生物降解能力［9］。GMO內部三維擴展的脂質雙分子層以及兩個獨立的水通道，厚度和直徑＜10nm，這些獨特的結構適合包載藥物分子，特別是水不溶性藥物。Zhang等［10］報道，當它作為藥物經皮給藥的載體，可明顯提高藥物的透皮效果［11］，說明立方液晶在皮膚經皮給藥方面發揮重要作用。

通常立方液晶常見有3種晶格結構:螺旋型晶格(Ia3d，CG)、雙菱形晶格(Pn3m，CD)和體心立方型晶格(Im3m，CP)。藥物的加入會引起立方液晶在幾種不同的晶格結構之間變化，在立方液晶中，Ia3d的臨界堆積參數約為1．2，小于Pn3m(約為1．3)。本實驗因為氟康唑為疏水性藥物，易與脂類分子極性區域作用，使得脂類分子的平均極性頭基面積增大，從而使堆積參數減小，導致體系更易形成Ia3d的立方液晶［12］。本研究通過PLM和SAXS等方法表征立方液晶凝膠的內部結構，成功制備出氟康唑立方液晶凝膠，并采用HPLC方法很好地檢測和控制氟康唑含量，為氟康唑外用經皮給藥制劑的研究提供了新的思路和方法。

作者：陳熙 付桂英 胡巧 陳珊珊 單位：安徽醫科大學解放軍307臨床學院 軍事醫學科學院附屬醫院藥學部