膽堿酯酶測量線性范圍評價范文

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《臨床檢驗雜志》2014年第六期

1評價方法

1．1不精密度評價在室內質控滿足CV＜2．7%［1］的條件下，參考CLSIEP15-A2文件［2］，用3個活性水平標本，每天測1批，每批測3次，連續測量5d。計算A～F檢測系統測量重復性不精密度、實驗室內復現性不精密度。

1．2線性范圍評價用A～F檢測系統，按CLSIEP6-A文件，分別測量血清標本組2的15個標本，每個標本測量2次，實驗于1d內完成。進行線性范圍評價的標準為以1～15號標本的理論活性水平為X軸，測量結果為Y軸作圖，檢查并剔除離群值。各廠家測量系統不精密度符合要求后，用MVS軟件進行相關回歸分析。首先以15個標本的理論值對實測均值進行多項式回歸分析，判斷測量數據的最佳擬合方程。若最佳擬合方程為二次或三次多項式即非直線，則計算各活性水平處非線性范圍偏差(DLi)，DLi為實驗標本各活性水平點處回歸多項式預測值與直線回歸方程預測值的差值。若滿足|DLi|≤5%，則認為在臨床可接受范圍內呈線性范圍。若|DLi|≥5%，則去除非線性范圍偏差較大的活性水平點后再次對各廠家測量系統線性范圍進行評價。本實驗采用兩種途徑去除非線性范圍偏差較大的活性水平點:一種是依次從高活性水平去除DLi較大的數據點，直至|DLi|≤5%，系統編號A1～F1。另一種為從測量結果的兩端去除具有最大DLi的數據，直至|DLi|≤5%，系統編號A2～F2。

2結果

2．1不精密度評價A～F檢測系統不精密度實驗結果見表2。在重復性條件下測量低、中、高3個活性水平標本的CV分別是1．34%、0．88%、0．50%、0．89%、1．21%、1．14%;0．98%、0．44%、0．63%、0．77%、1．03%、0．87%;0．78%、0．43%、0．68%、0．73%、0．84%、0．96%。在實驗室內復現性條件下測量相同標本的CV分別是1．61%、1．25%、0．86%、1．06%、1．32%、1．29%;1．09%、0．94%、0．90%、0．97%、1．15%、0．93%;1．23%、1．22%、0．84%、0．91%、1．00%、1．20%。

2．2線性范圍A～F檢測系統線性范圍及評價結果見表3，A～F系統在845～14004U/L的活性水平范圍內均呈非線性。A1、D1、E1、F1系統擬合方程為一次多項式，在845～7425U/L、845～9304U/L、845～8365U/L、845～6485U/L范圍內直接呈線性，B1與C1系統在僅存5個活性水平點時仍呈非線性。A2～F2系統中除E2系統最佳擬合為三次多項式外，其余系統均為二次多項式;A2～F2系統的線性范圍分別為1785～13064U/L、1785～9304U/L、1785～9304U/L、1785～14004U/L、1785～10244U/L、2725～10244U/L。

3討論

ChE的測量方法主要為化學法及酶耦聯法［4-5］。化學法是指在反應體系中加入一些與酶促反應無關、不影響酶催化活性的試劑如5，5''''-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)等來監測酶促反應信號變化，從而計算酶催化活性;酶耦聯法是利用酶催化反應的專一性、高效性，以測定耦聯酶的催化反應速率代表待測酶活性。筆者調查目前市售ChE測定試劑盒，發現ChE測量方法中丁酰硫代膽堿/六氰高鐵酸鉀(Ⅲ)法和丁酰硫代膽堿/5，5''''-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)法約占調查方法總數的88%，是目前臨床實驗室測量ChE的主要方法。日本臨床化學協會推薦的p-羥基苯甲酰膽堿/耦聯酶法雖特異性好，但因試劑價格昂貴且購買困難，國內臨床實驗室很少應用。因此本研究對應用以上使用最為廣泛的兩種方法為測量原理的ChE測定試劑盒進行評價，觀察各檢測系統的不精密度、線性范圍與廠家聲稱范圍的一致性。在不精密度評價方面，本研究對各檢測系統的重復性與實驗室內復現性不精密度進行了評價。重復性不精密度是指在重復性測量條件下的測量不精密度;實驗室內復現性不精密度是指由實驗室求得，在一組中間不精密度測量條件下的測量不精密度。在本研究中若以廠家聲稱不精密度范圍為合格標準，除A系統外，其他廠家測量系統均符合要求。但由于各檢測系統聲稱的不精密度合格范圍缺乏一致性，CV從0．4%到10%不等(見表2)，因此盡管A系統不精密度不符合廠家聲稱范圍，也不能證明A廠家測量系統質量劣于其他廠家。若以同一合格標準(CV＜2．7%)［1］再次評估，則發現A～F檢測系統不精密度均合格。因此，廠家在聲稱試劑產品的“不精密度”時應注意此問題。值得一提的是，在根據EP15-A2文件進行不精密度評價時會出現實驗室內復現性不精密度小于重復性不精密度的情況，可能與標本的重復測量次數少有關。在線性范圍評價方面，ChE參考區間為男4620～11500U/L，女:3930～10800U/L。根據ChE參考區間，本實驗室制備的線性范圍評價標本的活性水平為845～14004U/L。在該活性水平范圍內，A～F檢測系統均呈非線性。由于ChE活性水平的降低具有重要的臨床診斷意義，因此本實驗首先從ChE高活性水平點去除非線性范圍偏差較大的數據，評價廠家測量系統的線性范圍，研究結果顯示A～F檢測系統的實際線性范圍與廠家聲稱明顯不符(見表3)。若從測量數據兩端分別去除非線性范圍偏差較大的數據點，則各檢測系統線性范圍顯著增寬，提示A～F檢測系統在分析低活性水平ChE血清標本時非線性范圍偏差較大，分析缺乏可靠性。因此本研究選擇從兩端去除非線性偏差較大的活性水平點來評價線性范圍。實驗室在進行臨床標本測量前應對廠家測量系統線性范圍進行驗證。通常情況下方法學性能評價包括精密度、線性范圍、正確度、抗干擾能力4個部分，但由于目前尚無公認的ChE催化活性水平測量參考方法，因此暫時未對各檢測系統進行正確度評價。另由于國內外ChE測量方法涉及多種測量原理，且ChE本身具有遺傳多態性，不同表型和不同原理的測量方法其干擾因素不盡相同，抗干擾能力的評價較為復雜，將另文報道。

作者：金仁玲孫慧穎胡濱劉春龍陳寶榮單位：遵義醫學院北京航天總醫院檢驗科