大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型范文

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《實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床雜志》2015年第五期

1材料與方法

1.1觀察指標(biāo)

1.1.1組織形態(tài)學(xué)觀察抽血后，處死大鼠，立即解剖，觀察異位包塊情況，取異位內(nèi)膜包塊、在位子宮即逆流組、種植組左側(cè)子宮中段及對(duì)照的空白組大鼠子宮的一段，甲醛固定，常規(guī)制片，HE染色，在光鏡下觀察在位、異位內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜的組織形態(tài)學(xué)特點(diǎn)及差異。

1.1.2生化指標(biāo)術(shù)后8周，抽取大鼠腹主動(dòng)脈血2ml，用ELISA法檢測(cè)血清中EMAb（antiendometrialantibody，抗子宮內(nèi)膜抗體），CA125（cancerantigen125，癌抗原125）。

1.2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料用方差分析，結(jié)果以（x±s）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1組織學(xué)觀察術(shù)后第8周，解剖后見(jiàn)異位內(nèi)膜包塊大小不等，最大的為10.00mm×9.76mm，最小的為2.30mm×2.20mm，包塊為囊狀，內(nèi)有積液感，逆流組10只模中有3只未形成囊狀，建模成功率為70%；種植組10只模中有1只未形成囊狀，建模成功率為90%。種植組成模大鼠異位內(nèi)膜出現(xiàn)于腹壁5只、卵巢及輸卵管4只、皮下2只；逆流組異位內(nèi)膜出現(xiàn)于腹壁4只、卵巢及輸卵管3只、皮下1只。光鏡下空白組大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞排列完整，肌層較厚，結(jié)構(gòu)完整，腺體和血管豐富。逆流組與種植組在位及異位內(nèi)膜的上皮細(xì)胞扁平，呈長(zhǎng)柱狀或增生呈假?gòu)?fù)層結(jié)構(gòu)，大部分有分泌現(xiàn)象，少數(shù)可見(jiàn)腺體分布，肌層較薄，結(jié)構(gòu)不清。見(jiàn)圖1~圖3。

2.2生化指標(biāo)比較各組之間CA125（F=113.407）、EMAb（F=96.449）均有明顯差異（P＜0.05），且種植組、逆流組、空白組依次降低（P＜0.05）。

3討論

3.1造模方式手術(shù)移植法是目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道的建立EMT模型的主要方法。對(duì)模型動(dòng)物的選擇，多選用大鼠與兔，該實(shí)驗(yàn)選擇大鼠，是因?yàn)榇笫蟮募に厮捷^高，性周期短且規(guī)律，對(duì)造模的成功及觀察較為有利且較經(jīng)濟(jì)。該研究采用逆流法模擬人體的經(jīng)血逆流原理造模，更貼近于臨床發(fā)病實(shí)際，且手術(shù)操作簡(jiǎn)單。實(shí)驗(yàn)時(shí)手術(shù)應(yīng)做到以下幾點(diǎn)：（1）在手術(shù)前24h給大鼠灌服戊酸雌二醇，人為的使大鼠在手術(shù)時(shí)統(tǒng)一在發(fā)情期。術(shù)中，剖開(kāi)大鼠腹腔后可見(jiàn)大鼠的子宮均處于充盈狀態(tài)，方便手術(shù)的進(jìn)行。（2）逆流手術(shù)時(shí)，分離子宮，將子宮內(nèi)膜搔刮，接著用生理鹽水將其沖入盆腔，縮短了手術(shù)時(shí)間。子宮內(nèi)膜異位癥可出現(xiàn)在身體的不同部位，但絕大多數(shù)位于盆腔內(nèi)的卵巢、宮底韌帶、子宮下部后壁漿膜面及覆蓋直腸子宮凹陷、乙狀結(jié)腸的腹膜層[1]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)M人體的經(jīng)血逆流將搔刮后的子宮內(nèi)膜逆流沖入盆腔，可以觀察子宮內(nèi)膜異位癥的多發(fā)部位。逆流組及種植組異位內(nèi)膜均多出現(xiàn)于腹壁，其次為卵巢及輸卵管，最后為皮下。手術(shù)中保持無(wú)菌，使進(jìn)行造模的大鼠無(wú)1只發(fā)生術(shù)后感染；術(shù)后1周，切口已經(jīng)完全愈合。

3.2觀察指標(biāo)

3.2.1組織形態(tài)學(xué)觀察簡(jiǎn)單可行，同時(shí)測(cè)量異位灶的大小，將其量化，更能夠準(zhǔn)確判斷其成模情況，逆流組與種植組均出現(xiàn)內(nèi)異癥病灶，逆流組較種植組組織大體觀及鏡下觀均顯示成模率低，但仍有70%建模成功。

3.2.2生化指標(biāo)EMAb[2]是以子宮內(nèi)膜為靶抗原，并引起一系列免疫病理效應(yīng)的自身抗體。目前EMAb被認(rèn)為是EMT標(biāo)志性抗體，文獻(xiàn)[3]報(bào)道EMT患者中EMAb的檢出率可達(dá)70%~80%。CA125是腫瘤標(biāo)記物的一種，是一種高分子量的糖蛋白抗原，主要來(lái)自分泌期子宮內(nèi)膜，內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生CA125的量代表細(xì)胞的增活性。有文獻(xiàn)資料報(bào)道了血清CA125測(cè)定對(duì)內(nèi)異癥有較理想的診斷價(jià)值[4~6]。研究報(bào)道血清CA125與EMAb聯(lián)合測(cè)定可在敏感性下降不多的情況下，明顯提高特異性；同時(shí)如兩者均陽(yáng)性，EMT的診斷基本成立；兩者均陰性診斷基本不成立[7]。因此通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)血CA125、EMAb的變化可以較準(zhǔn)確的反映子宮內(nèi)膜異位癥的成模情況。本研究中逆流組較種植組血清CA125與EMAb均低，但較空白組明顯升高，證實(shí)逆流法建模成功。

3.3原因分析該研究中逆流法成模率較種植法稍低，考慮以下原因：（1）大鼠輸卵管組織較細(xì)，子宮內(nèi)膜組織不能夠完全通過(guò)子宮輸卵管進(jìn)入盆腔；（2）大鼠免疫功能強(qiáng)大，到達(dá)盆腔的部分子宮內(nèi)膜組織可被吞噬而不形成內(nèi)異癥；（3）搔刮過(guò)程中脫落的子宮內(nèi)膜組織的數(shù)量致成模率低。經(jīng)血逆流法制造子宮內(nèi)膜異位癥模型較種植法成模率稍低，但經(jīng)血逆流法操作更簡(jiǎn)單、手術(shù)時(shí)間短、創(chuàng)傷小、術(shù)后恢復(fù)快，避免了實(shí)驗(yàn)中手術(shù)因素導(dǎo)致的差異。該實(shí)驗(yàn)手術(shù)均是對(duì)宮腔操作，可以在不開(kāi)腹的情況下完成，對(duì)以后實(shí)驗(yàn)應(yīng)用于大型動(dòng)物如猿猴等的研究提供了新的造模方法；同時(shí)對(duì)于其他學(xué)說(shuō)所致子宮內(nèi)膜異位癥也可以提供借鑒。該過(guò)程更符合人體發(fā)病的自然過(guò)程，為以后臨床中研究子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)理及治療提供了新的方法，也拓寬了臨床研究的思路。但該實(shí)驗(yàn)僅考慮經(jīng)血逆流種植因素，其他方面的發(fā)病機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

作者：王哲 路芳 單位：山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 山東中醫(yī)藥大學(xué)