乳腺消郁顆粒的質量控制研究范文

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《中成藥雜志》2015年第六期

1薄層色譜鑒別

1.1川芎、當歸藥材薄層色譜鑒別取本品3批和缺川芎、當歸藥材的陰性樣品各2包(約24g)，加水200mL溶解，乙醚萃取3次，每次150mL，合并萃取液，濃縮蒸干，殘渣加乙醚3mL溶解，作為供試品溶液和陰性樣品溶液;取川芎0.1g，當歸0.1g，分別加乙醚15mL溶解，超聲處理20min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙醚1mL溶解，作為對照藥材溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液10μL以及對照品溶液5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑展開，取出后晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。結果表明，在相應的位置上，供試品色譜在與對照藥材顯示出相同顏色的熒光斑點，且陰性樣品無干擾，見圖1。

1.2淫羊藿藥材薄層色譜鑒別取本品3批和缺淫羊藿藥材陰性樣品各2包(約24g)，充分研磨，加乙醇240mL，50℃水浴溫浸30min，濾過，蒸干，加乙醇3mL溶解，作為供試品溶液和陰性樣品溶液;取淫羊藿藥材粉末0.1g，加乙醇10mL溶解，50℃水浴溫浸30min，濾過，蒸干，加乙醇3mL溶解，作為對照藥材溶液;精密稱取淫羊藿苷5mg，置于50mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻，即得質量濃度為0.1mg/mL的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)，吸取10μL供試品溶液和陰性樣品溶液、20μL對照藥材溶液、20μL對照品溶液，分別點于硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)為展開劑展開［4］，置紫外燈(365nm)下檢視。結果表明，在相應的位置上，供試品色譜與對照品顯示出相同的暗紅色斑點，然后噴以三氯化鋁試液再進行檢視，結果顯示出相同的橙紅色熒光斑點，且陰性樣品無干擾，見圖2。

1.3鎖陽藥材薄層色譜鑒別取本品3批和缺鎖陽藥材陰性樣品各2包(約24g)，充分研磨，加乙酸乙酯240mL溶解，超聲30min，濾過，濾液蒸干，加乙酸乙酯3mL溶解，作為供試品溶液和陰性樣品溶液;精密稱取熊果酸對照品5mg，置于10mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻，即得質量濃度為0.5mg/mL的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版，一部附錄VIB)，吸取20μL供試品溶液和陰性樣品溶液、10μL對照品溶液，分別點于硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)為展開劑展開［4］，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至顯紫紅色斑點。結果表明，在相應的位置上，供試品色譜與對照品顯示出相同的紫紅色斑點，且陰性樣品無干擾，見圖3。

2兩種成分的HPLC測定

2.1芍藥苷測定

2.1.1對照品溶液的配制精密稱取芍藥苷對照品12.62mg，置于20mL量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度線，搖勻，即得質量濃度為0.631mg/mL的芍藥苷對照品溶液。

2.1.2供試品溶液和陰性樣品溶液的配制取本品粉末和缺赤芍藥材陰性對照各1g，置于具塞錐形瓶中，加甲醇25mL溶解，稱定質量，超聲20min，放冷后用甲醇補足損失質量，再用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液和缺赤芍陰性對照溶液。

2.1.3色譜條件AlltimaC18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)，柱溫35℃，體積流量1mL/min，進樣量10μL。以甲醇－0.05%醋酸(23∶77)為流動相，檢測波長230nm。

2.1.4專屬性試驗取陰性樣品溶液，按照“3.1.3”項下色譜條件測定。結果發現，缺赤芍藥材樣品在相應出峰時間處沒有出峰，說明該方法專屬性良好，見圖4。

2.1.5線性關系的考察分別精密量取“3.1.1”項下芍藥苷對照品溶液0.25、0.5、1、2、3、4、5mL，置于5mL量瓶中，甲醇定容至刻度線，搖勻，得到不同質量濃度的對照品溶液，按照“3.1.3”項下色譜條件測定，記錄色譜圖。繪制芍藥苷質量濃度(X)和峰面積(Y)的標準曲線，計算回歸方程為Y=1.321×107X－18807，r=0.9999。結果表明，芍藥苷在31.55～631mg/L范圍內線性關系良好。

2.1.6精密度試驗按“3.1.3”項下色譜條件，精密稱取批號為130801樣品1份，按“3.1.2”項方法制備成供試液，連續進樣6次，測定芍藥苷峰面積，RSD為0.16%，表明精密度良好。

2.1.7重復性試驗精密稱取批號為130801樣品6份，按“3.1.2”項方法制備成供試液，按“3.1.3”項下色譜條件測定芍藥苷量。結果測得平均值為2.228mg/g，RSD為1.07%(n=6)，表明重復性良好。

2.1.8穩定性試驗精密稱取批號為130801樣品1份，按“3.1.2”項方法制備成供試液，在常溫下放置24h，按“3.1.3”項下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10、12h進樣，測定芍藥苷峰面積，RSD為0.28%，表明供試液在12h內穩定。

2.1.9加樣回收率試驗精密稱取批號為130801的乳腺消郁顆粒各6份，每份1g，分別精密加入質量濃度為0.409mg/mL的芍藥苷對照品溶液5mL，按“3.1.2”項方法操作，即得待測溶液。按“3.1.3”項下色譜條件測定，結果見表1。3.1.10樣品測定取3批樣品，按“3.1.2”項下方法操作，供試品溶液按“3.1.3”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，按外標一點法測定乳腺消郁顆粒中芍藥苷，結果見表2。

2.2松果菊苷測定

2.2.1對照品溶液的配制精密稱取松果菊苷對照品9.95mg，置于20mL棕色量瓶中，加50%甲醇溶解，稀釋至刻度線，搖勻，即得質量濃度為0.4975mg/mL的松果菊苷對照品溶液。

2.2.2供試品溶液和陰性樣品溶液的配制取本品粉末和缺肉蓯蓉藥材陰性對照品各1g，置于具塞錐形瓶中，加50%甲醇50mL溶解，稱定質量，超聲40min，放冷后用50%甲醇補足損失質量，再用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液和缺肉蓯蓉陰性對照溶液。

2.2.3色譜條件［4］AlltimaC18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)，柱溫35℃，體積流量1mL/min，進樣量10μL。以甲醇-0.1%甲酸(29∶71)為流動相，檢測波長334nm。

2.2.4專屬性試驗取陰性樣品溶液，按照“3.2.3”項下色譜條件測定。結果發現，缺肉蓯蓉藥材樣品在相應出峰時間處沒有出峰，說明該方法專屬性良好，見圖5。

2.2.5線性關系的考察分別精密量取“3.2.1”項下松果菊苷照品溶液0.1、0.5、1、1.5、2、2.5、3mL，置于5mL量瓶中，50%甲醇定容至刻度線，搖勻，得到不同質量濃度的對照品溶液，按照“3.2.3”項下色譜條件測定，記錄色譜圖。繪制松果菊苷質量濃度(X)和峰面積(Y)的標準曲線，計算回歸方程為Y=1.316×107X－5763.8，r=0.9999，表明松果菊苷在9.95～298.5mg/L范圍內線性良好。

2.2.6精密度試驗按“3.2.3”項下色譜條件，精密稱取批號為130801樣品1份，按“3.2.2”項制備成供試液，連續進樣6次，測得松果菊苷峰面積，RSD為0.97%，表明精密度良好。

2.2.7重復性試驗精密稱取批號為130801樣品6份，按“3.2.2”項制備成供試液，按“3.2.3”項下色譜條件測定松果菊苷量。結果測得平均值為4.472mg/g，RSD為0.43%(n=6)，表明重復性良好。

2.2.8穩定性試驗精密稱取批號為130801樣品1份，按“3.2.2”項制備成供試液，在常溫下放置24h，按“3.2.3”項下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10、12h進樣，測得松果菊苷峰面積，RSD為1.36%，表明供試液在12h內穩定。

2.2.9加樣回收率試驗精密稱取批號為130801的乳腺消郁顆粒各6份，每份1g，分別精密加入質量濃度為0.6076mg/mL的松果菊苷對照品溶液7.5mL，按“3.2.2”項方法操作，即得待測溶液。按“3.2.3”項下色譜條件測定，結果見表3。

2.2.10樣品測定取3批樣品，按“3.2.2”項下方法操作，供試品溶液按“3.2.3”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，按外標一點法測定乳腺消郁顆粒中松果菊苷，結果見表4。

3結論及討論

赤芍為毛茛科多年生草本植物芍藥或川赤芍的根，具有清熱涼血，散瘀止痛之功效。有資料表明［6］，大劑量赤芍對治療急性乳腺炎有很好的療效。芍藥苷是芍藥中的主要有效成分之一，是一種單萜類糖苷化合物。近年來，研究人員對其展開了一系列深入的研究，發現它具有多種藥理作用，且毒副作用小。殷天照等報道［7］，在中藥配伍中如果芍藥苷煎出量高，則治療乳腺增生效果較好。《本草匯言》中記述，肉蓯蓉是“養命門，滋腎氣，補精血之藥也。婦人沖任失調而陰氣不治，此乃平補之劑……”。現代研究發現［8］，肉蓯蓉中含有雄性激素樣作用活性成分，可以調節體內激素水平［9］。另外，松果菊苷在《中國藥典》2010年版中作為控制肉蓯蓉質量的有效成分。因此，把芍藥苷和松果菊苷作為本實驗中的活性成分測定指標來進行研究更具代表性，能夠更好地控制藥物的療效。芍藥苷的前處理實驗比較了以甲醇、90%甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、90%乙醇、70%乙醇、50%乙醇為溶劑，進行超聲提取。結果表明，采用甲醇為提取溶劑時，提取完全，操作方便，檢測時雜質峰少。同時，還以甲醇為提取溶劑，分別超聲20、30、40min，檢測同一批號中芍藥苷含有量，發現超聲20min時，不但所需時間短，而且提取完全。芍藥苷的分離試驗中，根據文獻［4-5，10-12］報道，分別采用甲醇－0.05mol/L磷酸二氫鉀、乙腈-0.1%磷酸、乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.1%醋酸作為流動相進行考察，同時結合生產檢測需要，選擇成本低、效率高、分離效果好的流動相。結果表明，甲醇-0.05%醋酸峰型和分離度理想，經優化后最終確定流動相為甲醇-0.05%醋酸(23∶77)。松果菊苷的分離試驗中，采用甲醇-0.1%甲酸(29∶71)等度洗脫，不僅出峰時間短，效率高，而且分離效果好。薄層色譜鑒別中，對起主要療效的有效成分當歸、川芎、淫羊藿、鎖陽進行了薄層色譜鑒別。結果表明，色譜斑點清晰，方法重復性好，而且陰性對照無干擾。綜上所述，本實驗方法可以作為乳腺消郁顆粒清膏、半成品、顆粒的質量控制手段，能夠有效控制其在生產過程中的質量，并且操作簡便，重復性好。

作者：朱冬可 吳佩穎 高崎 顧慧芬 單位：上海中醫藥大學 上海杏靈科技藥業股份有限公司