MCAO模型大鼠中醫研究范文

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《中國中醫基礎醫學雜志》2014年第六期

1材料與方法

1.1大鼠一般情況監測①體質量:體質量變化分別在手術前、術后24h、48h、72h進行體質量稱量、記錄;②模型動物精神、活動情況、皮毛、尾色、大便等。

1.2神經功能Zea-Longa評分分別在術后3h、6h、24h、48h、72h進行神經功能Zea-Longa評分，評分由兩位實驗人員共同觀察記錄，每只大鼠僅做1次神經功能Zea-Longa評分，實驗要求在單盲的條件下進行。

1.3放免法檢測血清CORT實驗末，大鼠經麻醉后由腹主動脈取血3ml加入空白試管中，4℃3000r/min離心15min，取上清置于-70℃冰箱中保存備用，放免法檢測血清CORT含量，由北京康源瑞德生物科技有限公司嚴格按照試劑盒說明書要求進行檢測。

1.4腦組織形態學觀察大鼠經腹主動脈取血后夾閉腹主動脈，剪開胸部將灌注針由左心室穿入主動脈，依次注入0.9%生理鹽水和4%多聚甲醛。灌注30min后，取出腦固定于4%多聚甲醛中24h，石蠟包埋。經HE染色，于光學顯微鏡下觀察大鼠腦組織織形態學改變。

1.5統計學方法采用SPSS13.0統計軟件進行統計分析，所有數據以均數±標準差(x珋±s)表示，數據符合正態分布，多個樣本均數比較采用單因素方差分析，多個樣本均數間的兩兩比較用最小顯著差法(leastsignificantdifference，LSD)。如方差不齊或不符合正態分布，用非參數檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1大鼠一般狀況一般大鼠在手術完成后1.5～2h蘇醒，手術完成3h后開始進行評分，可見大鼠偏癱癥狀明顯，表現為右側肢體廢用或力弱、前肢力弱、后肢拖拽，行走呈順鐘向追尾狀，甚則向一側傾倒;此外還可觀察到，48h、72h手術組的大鼠在造模后24h均出現左側瞼裂變小、左眼球腫脹并伴有分泌物，活動減少，身體蜷縮，體質量明顯下降及肛周污染、稀便、舌質紫暗等癥狀，各時點假手術組動物均未出現神經功能缺損癥狀。

2.2各組大鼠體質量變化表1顯示，與假手術組比較，術后24h、48h、72h各時間點手術組大鼠體質量均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)。

2.3各組大鼠神經功能Zea-Longa評分變化表2顯示，與假手術組比較，各時間點手術組大鼠Zea-Longa神經功能評分均明顯增高(P＜0.01)。

2.4各組大鼠血清CORT水平變化表3顯示，與正常組比較，假手術6h、48h、72h組血清CORT有所升高，但差異無統計學意義(P＞0.05);手術6h、48h、72h組血清CORT明顯升高，與48h、72h組比較差異有統計學意義(P＜0.01)。與假手術組比較，手術48h、72h組血清CORT明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)。與手術6h組比較，手術72h組血清CORT明顯升高(P＜0.01)。

2.5各組大鼠腦組織形態學觀察正常組、假手術6h、48h組及假手術72h組神經細胞形態完整，排列緊密，細胞核呈藍紫色，胞漿呈粉紅色，胞核完整，核仁清晰，細胞周圍間隙無水腫，各時點均無炎性細胞浸潤，也無梗死灶。缺血6h組缺血側大腦皮質神經元數量減少，結構破壞，排列紊亂，細胞體積大小不一，形態不規則，部分細胞空泡樣變，胞核深染，核膜不清，核仁不明顯，間質疏松，呈網狀改變，血管周圍間隙增寬。缺血48h組缺血側大腦皮質神經元缺血性損害加重，進一步變性壞死、溶解，間質更加疏松，空泡樣變明顯。缺血72h組缺血側大腦皮質神經元缺血性損害進一步加重，變性壞死、溶解，間質更加疏松，空泡樣變明顯。

3討論

中醫證候是機體生理病理整體反應狀態的概括，四診信息實際上就是證候的表征。動物證候表征研究具有較好的穩定性、可視性、可測性和可重復性［2］。mcao大鼠模型是國內外研究缺血性中風的經典模型，改進后的線栓法簡便、易重復，降低了動物死亡率，提高了成功率，復制的可逆性局灶性腦缺血模型是研究腦缺血再灌注損傷較為理想的模型［3］。在MCAO大鼠模型、雙側頸總動脈結扎大鼠模型、單側頸總動脈結扎大鼠模型的3種腦缺血模型中，MCAO模型可能為最合適的誘發血瘀證生物表征的腦缺血模型［4］。本研究結果顯示，MCAO大鼠模型呈現活動減少、蜷縮、精神萎靡、毛色枯槁、飲食減少、體質量明顯下降、肛周污染、稀便、舌質紫暗等癥狀，造模初期可見偏癱癥狀明顯，表現為右側肢體廢用或力弱，行走呈順鐘向追尾狀，甚則向一側傾倒。MCAO大鼠模型臨床表現符合腎虛血瘀證候標準［5］。

中醫認為，“年四十而陰氣自半，起居衰矣”，年老腎精不足，元氣虧虛，臟腑功能衰弱，肢體活動遲緩，氣血運行緩慢，血流不暢致腦脈瘀滯不通而發中風。正如《醫林改錯•王清任》曰:“半身不遂，虧損元氣，是其本源。”《醫學衷中參西錄•張錫純》亦云:“人之腦髓空者……甚或猝然昏厥，知覺運動俱廢。”下丘腦-垂體-腎上腺軸是機體神經內分泌系統重要的組成部分。雖有報道顯示與正常人比較，腎陽虛患者尿17羥皮質類固醇降低，而腎陰虛患者時高時低、變化不定［6］。但隨著年齡的增長，血清皮質醇水平逐漸上升，高齡老年者更加明顯［7］。神經-內分泌-免疫網絡的功能失調將進一步加重腦缺血再灌注后的神經元損傷。腦缺血再灌注后2～24h時間內，實驗大鼠血漿的ACTH、CORT含量明顯增高［8］。腦缺血后大鼠垂體體質量明顯減輕，血漿CRH、ACTH和CORT濃度呈一致性先短暫升高后持續下降［9］。本研究結果顯示，模型大鼠在缺血6h時血清CORT增高，隨著缺血時間的延長，血清CORT進一步增高，表明大鼠存在神經內分泌功能紊亂。

MCAO30min缺血側基底結區首先出現大量的暗神經元和壞死，至MCAO1h這些改變逐漸擴展到皮層。如果組織持續缺血、壞死和暗神經元將在組織水腫期后急劇增多，這些改變并不因組織灌注的恢復而逆轉［10］。本研究發現，模型大鼠腦組織形態學發生明顯改變，在梗死側皮層區神經元數量減少，結構破壞，排列紊亂，而缺血48h組、72h組缺血側大腦皮質神經元變性壞死、溶解，間質更加疏松，空泡樣變明顯。本研究從MCAO大鼠模型臨床表征及生物學基礎進行探討，表明MCAO大鼠存在明顯的腎虛血瘀證候，為中醫藥研究腦中風提供實驗基礎。

作者：吳相春王少卿唐璐朱文浩高穎單位：北京中醫藥大學東直門醫院神經內科